El inhibidor de histonas deacetilasa romidepsina induce diferenciación en linfomas de origen centrogerminal a través de la regulación BCL6

Abstract

[Introducción]: BCL6 es un represor transcripcional indispensable para la generación del centro germinal linfoide. La expresión desregulada de BCL6 está implicada en el desarrollo de linfomas. Nuestro grupo ha demostrado que BCL6 se regula epigenéticamente en células de linfoma. La romidepsina es un inhibidor de histona deacetilasas aprobado para el tratamiento de algunos tipos de linfoma de células T, pero su potencial frente a los linfomas de células B no ha sido investigado en profundidad. El objetivo de este trabajo es analizar los efectos de la romidepsina en apoptosis, ciclo celular y diferenciación, así como estudiar la regulación epigenética de BCL6 mediada por este fármaco en líneas celulares de linfoma de origen centro germinal. [Métodos]: Los efectos de distintas concentraciones de romidepsina y a distintos tiempos se evaluaron en una variedad líneas celulares derivadas de pacientes con linfoma de Burkitt o de linfoma difuso de célula grande (LBDCG). Se llevaron a cabo estudios de proliferación, análisis de apoptosis (unión de Annexina V) y ciclo celular (ioduro de propidio). Los niveles de RNA y proteína se analizaron mediante RT-PCR y westem blot, respectivamente. Se estudiaron marcadores de superficie propios de los diferentes estadios de diferenciación de células B por citometría de flujo. El efecto directo de la romidepsina sobre la regulación de la actividad represora de BCL6 se midió mediante ensayos luciferasa y el análisis de la acetilación de BCL6 por inmunoprecipitación de proteína. Finalmente, se analizó la regulación de BCL6 en presencia de romidepsina, mediada por el factor de transcripción CTCF, utilizando la técnica de inmunoprecipitación de cromatina (ChiP). [Resultados]: El tratamiento con romidepsina induce apoptosis en la mayoría de las líneas de linfoma de origen centrogerminal, aunque con un grado variable de respuesta y de forma dosis y tiempo dependiente. Todas las líneas analizadas muestran una parada del ciclo celular en fase GO/G 1 seguido de apoptosis y/o diferenciación. Las líneas de linfoma de Burkitt mostraban una disminución en la expresión de BCL6, acompañada del aumento de alguno de sus genes diana (CCND2, P21 y P27), junto con la bajada de los niveles de otros genes de centro germinal como PAX5 y BACH2. Al mismo tiempo se observó un incremento en genes propios del programa de diferenciación a célula plasmática como PRMD1/BLIMP1. En las líneas de linfoma difuso de célula grande, se produce disminución de BCL6, sin cambios importantes en los genes del programa de diferenciación plasmática. Este efecto va acompañado de un aumento del marcador de superficie CD138 indicador de diferenciación plasmática. Por otro lado, en presencia de romidepsina se observa un aumento en la acetilación de BCL6 y una disminución su actividad represora. CTCF regula positivamente a BCL6 mediante su unión al exon 1 del gen, acompañado de marcas de cromatina activa. En presencia de romidepsina, esta unión es revertida y se incorporan marcas de cromatina represiva. [Conclusiones]: Nuestros resultados indican que la romidepsina induce apoptosis en los LNH de origen centrogerminal y desencadena el programa de célula plasmática. La regulación epigenética de BCL6 está implicada en este proceso.