Transmissão de Salmonella Typhimurium monofásica após o nascimento em suínos

Abstract

Salmonella continua a ser uma importante fonte de infeção gastrointestinal hoje em dia, e um serovar em particular, S. 4,[5],12:i:- ou S. Typhimurium monofásica, surgiu recentemente e disseminou-se rapidamente entre animais e humanos a nível mundial. É escasso o conhecimento da dinâmica de transmissão deste serovar em particular em suínos, pelo que o objetivo deste estudo foi averiguar a existência ou não de transmissão mãe-filho pósnascimento de S. Typhimurium monofásica. As amostras foram obtidas de dez ninhadas provenientes de uma exploração intensiva industrial: da porca e de 7 leitões de cada ninhada após nascimento. O isolamento de Salmonella spp. foi efetuado de acordo com o protocolo descrito no ISO 6579:2002, Anexo D, e a serotipificação segundo o esquema de Kauffmann-White-Le Minor. O género e o serovar dos isolados foram confirmados através de PCR. A deteção fenotípica de resistência a 13 antibióticos foi efetuada de acordo com as diretrizes do “Clinical Laboratories Standards Institute” (CLSI). A deteção dos genes responsáveis pela resistência aos antibióticos foi efetuada por PCR, e o painel incluiu os genes blaTEM, blaSHV, blaOXA-1, blaCTX-M, aadA, aac(3)-IV, aac(6)-Ib, tet(A), tet(B), flor, sul1, sul2, dfrA1, qnrA, qnrB e qnrS. A extração de plasmídeos foi efetuada segundo um protocolo adaptado de Kehrenberger, Friederics, de Jong, Michael e Schwarz (2006) e o tamanho dos plasmídeos avaliado após linearização com a exonuclease S1. A clonalidade dos isolados foi determinada através de eletroforese em gel de campo-pulsado (PFGE) após restrição com a enzima XbaI com base no protocolo da PulseNet. Grupos clonais e subgrupos clonais foram definidos de acordo com os parâmetros recomendados por Carriço et al (2005). Em três das 10 famílias amostradas (porca e pelo menos um leitão) detetaram-se isolados de S. Typhimurium monofásica. Todos os animais da família A, a mãe e 3 em 7 leitões da família B, e todos os elementos menos um da família D foram positivos (n=19). Dois padrões de resistência foram identificados: em 17 isolados detetou-se resistência a ácido nalidíxico, amoxicilina/ampicilina, estreptomicina, neomicina, sulfamidas e tetraciclina. Nas restantes 2 verificou-se uma resistência adicional a amoxicilina-ácido clavulânico. Quanto aos genes de resistência identificados, todos os isolados continham blaTEM, tet(B) e sul2, excetuando um negativo a sul2. Apenas um plasmídeo de 5600pb foi identificado em todas os isolados, e todos foram incluídas no mesmo grupo clonal. Este estudo constitui a primeira demonstração de transmissão mãe-leitão de S. Typhimurium monofásica em suínos, e revela uma via de transmissão que poderá ser importante na manutenção e rápida disseminação deste serovar a nível mundial.

ABSTRACT - After birth transmission of monophasic Salmonella Typhimurium in pigs - Salmonella remains an important source of gastrointestinal infection nowadays, and a particular serovar, S. 4,[5],12:i:- or monophasic S. Typhimurium, has recently emerged and quickly disseminated through animals and humans worldwide. Little is known about the transmission dynamics of this particular serovar in pigs, and as such the aim of this study was to determine the existence or not of after birth mother-descendent transmission of monophasic S. Typhimurium. Samples were taken from ten litters of an intensive-production industrial farm: from the sow and 7 piglets of each litter after birth. Salmonella spp. was isolated according to the protocol described in ISO 6579:2002, Annex D, and serotyped according to the Kauffmann-White-Le Minor scheme. Genus and serovar of the isolates were confirmed by PCR. Phenotypic detection of resistance to 13 antimicrobials was done following Clinical Laboratories Standards Institute (CLSI) guidelines. Detection of antimicrobial resistance genes was performed by PCR, and screening included the genes blaTEM, blaSHV, blaOXA-1, blaCTX-M, aadA, aac(3)-IV, aac(6)-Ib, tet(A), tet(B), flor, sul1, sul2, dfrA1, qnrA, qnrB and qnrS. Plasmid extraction was performed according to a protocol adapted from Kehrenberger, Friederics, de Jong, Michael e Schwarz (2006) and the plasmid size assessed after exonuclease S1 linearization. Clonality of the isolates was evaluated through pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) with XbaI enzyme restriction based on the PulseNet protocol. Pulsed-field type clusters and subtypes were assessed according to the settings recommended by Carriço et al (2005). Three of the 10 sampled families (sow and at least one piglet) were positive to monophasic S. Typhimurium. All the animals in family A, the mother and 3 out of 7 piglets in family B, and all but one element of family D were positive (n=19). Two resistance patterns were identified: in 17 isolates, resistance to nalidixic acid, amoxacilin/ampicilin, streptomycin, neomycin, compound sulphonamides and tetracycline was detected. The remaining 2 were additionally resistant to amoxacilin-clavulanic acid. As for the identified resistance genes, all isolates contained blaTEM, tet(B) and sul2 except one, negative to sul2. Only one plasmid of 5600pb was identified in all the isolates, and every isolate was included in the same PFGE cluster. To our knowledge, this study is the first report of sow-to-piglet transmission of monophasic S. Typhimurium and sheds light on a transmission pathway that might be important in the maintenance and rapid dissemination of this serovar worldwide.