Ανάπτυξη και επικύρωση μεθόδων υγρής χρωματογραφίας υψηλής πίεσης (HPLC) για τον προσδιορισμό υπολειμμάτων διαφόρων αντιμικροβιακών παραγ...

Abstract

The accelerated growth of aquaculture has resulted in a series of harmful effects to human health. The widespread and unrestricted use of antibiotics in this industry, to prevent bacterial infections, leads to remaining amounts in the aquatic environment. This has resulted in the emergence of antibiotic-resistant bacteria in aquaculture environments, in the increase in antibiotic resistance in fish pathogens as well as in the transfer of these resistance determinants to human pathogens. Moreover, the use of large amounts of antibiotics may lead to the presence of residual antibiotics in fish tissue and fish products. Fluoroquinolones, penicillins, amphenicols and tetracyclines, exhibiting activity against both Gram-positive and Gram-negative bacteria, are widely used for the treatment and prevention of diseases in fish. The aim of this study was firstly to develop confirmatory high pressure liquid chromatographic (HPLC) methods for the determination of quinolone, penicillin, amphenicol and tetracycline antibiotics in gilthead seabream and salmon tissue and in fishfeed. All the developed methods were fully validated in terms of selectivity, linearity, accuracy, precision, stability and sensitivity according to the European Union Decision 2002/657/EC. All limits of quantitation (LOQ) values achieved were much lower than the Maximum Residue Limit value set by the E.U.

Τις τελευταίες δεκαετίες, τα αντιβιοτικά χρησιμοποιούνται συχνά στις ιχθυοκαλλιέργειες, ως πρόσθετες ουσίες των ιχθυοτροφών, και επίσης ως προφυλακτικοί και θεραπευτικοί παράγοντες. Ο κύριος κίνδυνος που συνιστά αυτή η τακτική είναι η συνεχώς αυξανόμενη βακτηριακή αντίσταση σε ολοένα και περισσότερα αντιβιοτικά, καθώς και η εμφάνιση αλλεργικών αντιδράσεων από τους καταναλωτές σε αυτά. Επομένως καθίσταται επιτακτική η ανάγκη ελέγχου και προσδιορισμού της παρουσίας αντιβιοτικών καταλοίπων στους ιστούς των ψαριών της ιχθυοκαλλιέργειας με άμεσο στόχο την προστασία της υγείας των καταναλωτών από την εμφάνιση ανθεκτικών στα αντιβιοτικά βακτηριακών στελεχών στον άνθρωπο. Σκοπός της παρούσας διδακτορικής διατριβής ήταν η ανάπτυξη και η επικύρωση μεθόδων Υγρής Χρωματογραφίας Υψηλής Πίεσης (HPLC) για τον ταυτόχρονο διαχωρισμό και προσδιορισμό υπολειμμάτων διαφόρων αντιβιοτικών ενώσεων (κινολονών, πενικιλινών, αμφαινικολών και τετρακυκλινών), καθώς και η εφαρμογή τους στον ποσοτικό προσδιορισμό τους σε δείγματα ιχθύων ιχθυοκαλλιέργειας. Όλες οι μέθοδοι που εφαρμόστηκαν επικυρώθηκαν με βάση τις απαιτήσεις που έχει καθορίσει η Ευρωπαϊκή νομοθεσία μέσω της οδηγίας 2002/657/EC περί κριτηρίων που πρέπει να πληρούν τεχνικές και μέθοδοι ανάλυσης για τον προσδιορισμό καταλοίπων αντιβιοτικών σε τρόφιμα που προορίζονται για το καταναλωτικό κοινό. Έτσι όλες οι μέθοδοι ελέγχθηκαν ως προς τη γραμμικότητα, την επαναληψιμότητα, τη πιστότητα, την ευαισθησία, την εκλεκτικότητα, τη σταθερότητα των ενώσεων, το όριο απόφασης και την ικανότητα ανίχνευσης.