Multispektrální nanosondy pro detekci metodou spektrální cytometrie

0517236 - ÚMCH 2020 RIV CZ cze L - Prototyp, funkční vzorek
Etrych, Tomáš - Kudláčová, Júlia - Bárta, F. - Hovorka, O. - Kalina, T. - Kužílková, D. - Brdičková, N.
Multispektrální nanosondy pro detekci metodou spektrální cytometrie.
[Multispectral nanoprobes for spectral cytometry.]
Interní kód: MSS-07 - MSS-12 + OKT-8 ; 2019
Technické parametry: Předmětem je multispektrální polymerní nanosonda pro pokročilou spektrální cytometrii. Nanosonda sestává z hydrofilního kopolymeru na bázi (N-(2-hydroxypropyl)methakrylamid)u (HPMA) s navázanými fluorofory Dy-490 a Dy-647P1 v různém molárním poměru, a z monoklonální protilátky. Fluorescenční kopolymer s koncovou azidovou skupinou byl připraven řízenou RAFT polymerací HPMA s 3-(3-methakryloylamidopropanoyl)thiazolidin-2-thionem s výslednou úzkou distribucí molárních hmotností. Fluorofory byly navázány v různých molárních poměrech pomocí aminolytické reakce a na azidovou skupinu polymeru byl zaveden maleinimid pro vazbu na protilátku. Vazba fluoroforů a maleinimidu byla sledována pomocí HPLC, obsah fluoroforů byl stanoven pomocí UV-VIS a obsah maleinimidu pomocí HPLC. Fluorescenčně značené polymery s různým obsahem fluoroforů byly konjugovány s redukovanou protilátkou OKT-8. Rozlišení jednotlivých spektrálních kombinací bylo prokázáno in vitro pomocí analýzy FACS. Osoba pro jednání: Ondřej Hovorka, ITA-Intertact, s. r. o.
Ekonomické parametry: Jedná se o unikátní multispektrální nanosondy využitelné v technologii mnohobarevného „barcodingu“ pro průtokovou cytometrii, umožňující simultánní značení vzorků v klinické diagnostice. Takový přístup výrazně zpřesní vzájemnou porovnatelnost dat a tím pádem i diagnostických výsledků. Naměřené hodnoty v klinické diagnostice tak budou kvantitativně porovnatelné a kalibrovatelné. Díky tomu bude možné výrazně zpřesnit diagnostiku onemocnění, stanovení stádia a fáze choroby či zhodnotit ostatní faktory přímo ovlivňující volbu a nastavení optimální terapie. Personalizovaná medicína je nejmodernějším a nejprogresivnějším přístupem, kdy terapeutický režim je specificky přizpůsoben konkrétnímu pacientovi tak, aby terapie byla co nejúčinnější a současně přinesla co nejméně nežádoucích vedlejších efektů. Námi připravený barkódovací cytometrický systém, tak může v budoucnu podstatně zefektivnit a tím zlevnit terapii onkologických i ostatních pacientů.
Grant CEP: GA MPO(CZ) FV10370
Klíčová slova: multispectral probes * fluorescence * spectral cytometry
Obor OECD: Polymer science

Byly připraveny multispektrální polymerní nanosondy, které sestávají z polymeru na bázi poly(N-(2-hydroxypropyl)methakrylamid)u (pHPMA) obsahujícího různé molární poměry fluoroforů Dy-490 a Dy-647P1 a z monoklonální protilátky, pro jednoznačnou identifikaci pomocí spektrální dekonvoluce. Jedinečná kombinace fluoroforů na polymerní nanosondě poskytuje unikátní fluorescenční „spektrální otisk prstu“ pro využití v mnohoparametrové detekci metodou spektrální cytometrie. Pomocí těchto multispektrálních nanosond lze identifikovat až šest spektrálních kombinací ve dvou detekčních kanálech.

The polymer multispectral nanoprobes, consisted of a polymer based on poly(N-(2-hydroxypropyl)methacrylamide) (pHPMA) containing various molar ratios of fluorophores Dy-490 and Dy-647P1 and a monoclonal antibody, for unambiguous identification by spectral deconvolution were prepared. The unique combination of fluorophores present on the nanoprobe provides an unequalled “spectral fingerprint” for use in multicolour spectral cytometry. Using these multispectral nanoprobes, it is possible to identify as many as six spectral combinations in two detection channels
Trvalý link: http://hdl.handle.net/11104/0302565