Isolamento e caracterização de células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo de bovinos
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Data
2017-01-26
Autores
Ikeda, Taticia Lieh [UNESP]
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Editor
Universidade Estadual Paulista (Unesp)
Resumo
As células-tronco mesenquimais (CTM) representam uma atrativa ferramenta para a medicina regenerativa, a engenharia de tecidos e a terapia celular. Na espécie bovina, as pesquisas sobre a caracterização de CTM ainda são raras, principalmente utilizando-se o tecido adiposo como fonte de obtenção. Com o objetivo de isolar e caracterizar CTM derivadas do tecido adiposo de bovinos, foram utilizadas amostras de seis vacas e isoladas CTM por meio de digestão enzimática e cultivo celular em monocamada. As células em primeira (P0) e terceira passagem (P3) foram, então, submetidas a caracterização imunofenotípica por citometria de fluxo. A diferenciação osteogênica e adipogênica foi avaliada microscopicamente após 10 dias de indução e por qPCR em tempo real após 3 e 15 dias de indução. Foram obtidas células fibroblastóides e aderentes ao plástico. Estas apresentaram, na citometria de fluxo, marcação positiva para CD44 (86,6 % em P0 e 76,6 % em P2) e vimentina (82,48 % em P2), baixa marcação de CD34 (8,7 % em P0 e 1,8 % em P2) e marcação negativa para MHC II (2,1 % em P0 e 2,3 % em P2). Na avaliação microscópica, todas as amostras responderam positivamente às diferenciações nas linhagens osteogênica e adipogênica, além de apresentarem expressão de osteopontina e colágeno tipo I e PPAR-γ, respectivamente, pelo qPCR em tempo real. Não foi observada a expressão de osteocalcina em nenhuma amostra submetida a indução osteogênica. Os resultados obtidos indicam o tecido adiposo de bovinos como uma fonte viável de CTM para medicina regenerativa e terapia celular.
Descrição
Palavras-chave
Citometria de fluxo, Expressão gênica, Potencial de diferenciação, Marcadores de superfície, Vaca