Efeito da proteína Galectina-1 em modelos experimentais de conjuntivite induzida pelo composto 48/80 ou ovalbumina em roedores

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Data

2018-02-26

Autores

Mello, Claudia Bosnic

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Editor

Universidade Estadual Paulista (Unesp)

Resumo

Introdução. A galectina-1 (Gal-1) é uma proteína de 14,5 kDa com afinidade aos ßgalactosídeos que contribui para a homeostase da inflamação, regulando o processo de transmigração dos leucócitos e liberação de citocinas. Contudo, o papel da Gal-1 em olhos normais e inflamados tem sido pouco estudados. Objetivo. Analisar o efeito do tratamento farmacológico com a Gal-1 recombinante (rGal-1) nos olhos de roedores utilizando dois modelos experimentais de conjuntivite. Métodos. Para o modelo de conjuntivite alérgica (CA), camundongos Balb/c machos foram imunizados via subcutânea com 5 μg de ovalbumina (OVA) nos dias 0 e 7. Nos dias 14-16, 0,3 μg/animal de Gal-1 foi instilado no saco conjuntival seguida, após 15 min, do desafio com 250 μg de OVA. Os animais SHAM (grupo controle) receberam soro fisiológico estéril. Após 4 e 24h do último desafio, os animais foram eutanasiados para coleta de sangue, olhos e pálpebras. Para o outro modelo de conjuntivite, ratos Wistar machos receberam no saco conjuntival do olho direito instilação do composto 48/80 (C48/80; 100 mg/mL), um secretagogo dos mastócitos. Como controle, o olho contralateral (esquerdo) foi instilado apenas com PBS. Outros ratos receberam em ambos os olhos instilação de 0,3 ou 3 µg/olho de Gal-1 ou 40 mg/mL de cromoglicato de sódio (SCG), e após 10 minutos, o C48/80 (olho direito) ou PBS (olho esquerdo - controle). Após 6h, os animais foram eutanasiados para coleta das pálpebras e olhos. Resultados. No modelo de CA, a instilação de Gal-1 diminuiu a proporção de mastócitos desgranulados e influxo de leucócitos na conjuntiva palpebral, assim como a produção de IFN-, em comparação com o grupo CA não tratado. A conjuntivite induzida pelo C48/80 provocou edema de pálpebras, conjuntiva e lacrimejamento, sinais clínicos reduzidos pela administração de Gal-1 (0,3 e 3 µg) e SCG. Corroborando esses achados, a administração do C48/80 aumentou a proporção de mastócitos desgranulados (62%, p < 0,01) e influxo de eosinófilos na conjuntiva palpebral em comparação com o controle (32%). Os tratamentos com Gal-1 (0,3 e 3 µg) e SCG reverteram esses efeitos, apresentando menor proporção de mastócitos desgranulados (31-36%) e eosinófilos, observações confirmadas pela presença de maiores níveis de histamina e peroxidase eosinofílica nos macerados dos olhos. Além disso, os tratamentos com Gal-1 (3 μg) e SCG diminuíram os níveis de IL-4, bem como a ativação das quinases ativadas por mitógenos (p38, ERK e JNK) em relação aos olhos ativados pelo C48/80 e não tratados. Conclusão. Nossos dados evidenciam que o tratamento farmacológico por instilação ocular de Gal-1 tem um potente efeito imunomodulador nos dois modelos de conjuntivite, indicando esta lectina como um importante alvo terapêutico na alergia ocular.
Introduction: Galectin-1 (Gal-1) is a 14.5 kDa protein with affinity for ß-galactosidey that contributes to inflammatory homeostasis, regulating leukocyte transmigration and cytokine release. However, the role of Gal-1 in normal and inflamed eyes has been little studied. Objective: To analyze the effect of pharmacological treatment with recombinant Gal-1 (rGal-1) on the eyes of rodents using two experimental models of conjunctivitis. Methods: Male Balb / c mice were divided into five groups (AC 4 / 24h; AC + rGal-14/24, sham), immunized subcutaneously with 5 μg ovalbumin (OVA, grade V), and on days 14-16 pre-treated with instillation of r Gal-1 (0.3 μg / animal) and challenged after 15 minutes with OVA with 250 μg of OVA in the conjunctival sac. SHAM animals received sterile saline. After 4 and 24 hours of the last challenge the animals were euthanized for collection of blood, eyes and eyelids. In another set of experiments, male Wistar rats were divided into four experimental groups (I to IV) and controls (n = 6-10 / group). Conjunctivitis was induced by instillation of the compound 48/80 (C48 / 80) 100 mg / mL in the conjunctival sac of the right eye, group I. As control, the contralateral (left) eye was instilled only with PBS. Groups II, III and IV received pharmacological pre-treatment with 0.3 μg / eye of rGal-1, 3 μg / eye of rGal-1, and 40 mg / mL of sodium cromoglycate (SCG), respectively, and after 10 minutes, the 48/80 or PBS (control eyes) was instilled. After 6 hours, the animals were euthanized for collection of the eyelids and eyes. Results: In the AC model the histological analysis of the palpebral conjunctiva showed a reduction in the proportion of degranulated mast cells (40%) compared to the untreated AC group (61%) after 24 h of the last OVA challenge. At the same experimental time, the effect of rGal-1 was also associated with lower influx of leukocytes to the palpebral conjunctiva. Thus, the exogenous action of Gal-1 is associated with the reduction of mast cell activation in the AC experimental model and, consequently, in the regulation of ocular allergy C48 / 80-induced conjunctivitis caused eyelid edema, conjunctiva and tearing, clinical signs that were associated with a significant increase in the proportion of degranulated mast cells in the palpebral conjunctiva compared to the control group and were reversed after rGal-1 ( 0.3 and 3 μg) and sodium cromoglycate (40 mg / mL), confirming the regulatory effect of Gal-1 on mast cell activation. As expected, a significant increase in the proportion of degranulated mast cells (62%, p <0.01) and lower levels of histamine was exhibited after administration C48 / 80 compared to control (32%). This effect was reversed by rGal-1 and SCG treatments that reduced mast cell degranulation (3136%), eosinophil migration and eosinophil peroxidase (EPX) expression in the eyes. Treatments with rGal-1 (3 μg) and SCG also decreased IL-4 levels, as well as the activation of mitogen-activated protein kinases (p38, ERK and JNK) compared to untreated C48 / 80 eyes. Conclusion: Our data evidenced that ocular pharmacological treatment by instillation of rGal-1 has a potent immunomodulatory effect in the two models of conjunctivitis, indicating this lectin an important therapeutic target in ocular allergy

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Palavras-chave

Eosinófilo, Inflamação, Mastócito, Olho, Quinases ativadas por mitógeno, Eosinophil, Eye, Inflammation, Mast cell, Mitogen-activated protein kinases

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