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http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8QSMNN| Type: | Dissertação de Mestrado |
| Title: | Coronavírus canino: fatores limitantes de padronização para multiplicação em linhagens celulares e ensaio sorológico |
| Authors: | Sergio Luiz de Freitas Balsamao |
| First Advisor: | Aurora Maria Guimaraes Gouvea |
| First Referee: | Romulo Cerqueira Leite |
| Second Referee: | Ronaldo Braga Reis |
| Third Referee: | Andrey Pereira Lage |
| metadata.dc.contributor.referee4: | Zelia Ines Portela Lobato |
| Abstract: | Foram estudadas três linhagens celulares contínuas, CRFK, MDCK e A-72 quanto a seus requerimentos nutricionais e de desenvolvimento, e quanto à sensibilidade ao coronavírus canino (CVC) amostra K-378-20. As melhores condições para o cultivo da linhagem A-72 foram utilizando o meio L15 GIBCO com 10% de soro fetal bovino (SFB) em concentrações iniciais de 3,0 a 4,0 x 10 4 cél/cm' em garrafas plásticas descartáveis, com repiques semanais e troca de meio com 5% de SFB a cada dois dias de incubação. Concentrações iniciais de 7,0 a 8,0 x 10 4 cél/cm' em L15 com 5% de SFB em estufa a 37°C sem atmosfera de CO2 foram ótimas para a cultura em microplacas. Foi a mais sensível ao CVC, obtendo-se bons títulos (10 5 a 10 6 DICC 50/25uL) em menor tempo, porém foi a linhagem mais trabalhosa e instável, sendo utilizada para ativação e isolamentos iniciais. Para as linhagens CRFK e MDCK as melhores condições foram usando o MEM-EAGLE com aminoácidos não essenciais (NEAA) com 10% de SFB em concentrações iniciais de 2,0 a 3,0 x 10 4 cél/cm' com repiques duas vezes por semana. Foram linhagens mais resistentes que a A-72, porém, menos sensíveis ao CVC, sendo que na MDCK não foi observado efeito citopático (ECP). Concentrações iniciais de 6,0 a 7,0 x 10 4 cél/cmz foram as melhores para o cultivo de CRFK em microplacas, utilizando-se meio L15 com 5% de SFB em estufa a 37°C sem atmosfera de CO2. Para a replicação de CVC amostra K-378-20 as melhores condições foram obtidas utilizando faixa de pH entre 5,0 e 7,0, tempo de adsorção de 90 minutos, com formação de 90% de ECP em três dias em A-72 e cinco dias em CRFK, foi obtido em média 10 5 DICC50/25) ul de título infectante com tempo ótimo de leitura de 72 a 96 horas pós-inoculação. Através do uso da técnica de imunodifusão em agar gel (IDAG) foi evidenciada a presença de 29 soros (19%) positivos para 0 CVC K-378- 20, em amostra de 157 soros caninos coletados em Belo Horizonte, em período que antecedeu a comercialização de vacinas anti-CVC no pais. |
| Abstract: | There were studied three continual cells lines (CRFK, MDCK and A-72), for the purpose of nutritional requirements and development and also for sensitivity to the canine coronavirus (CCV). The best conditions for A-72 line were done using the L-15 GIBCO media with 10% of fetal bovine sera (FCS) on initial concentrations of 3,0 to 4,0 x 10 4 cells/cm' in disposable plastic bottles with weekly sub-culture and change of the medium with 5% of FCS each two days of incubation. Initial concentrations of 7,0 to 8,0 x 10 4 cells/cm' in L-15 with 5% FCS at 37°C without the CO2 atmosphere were excellent for the microplates cultures. It was the most sensitive to the CCV, obtainning good titers in less time,10 5 10 6 DICC50/25uL however the most difficult and unstable, V being used for the initial activation and isolations. For the CRFK and MDCK lines the best conditions were a using the MEM-EAGLE with non essential aminoacids (NBAA) with 10% of FCS on initial concentrations of I 2,0 to 3,0 x 10 4 cells/cmz with sub-culture twice a week. They were more resistant lines than the A-72, = however, less sensitive to the CCV, and on MDCK there was not formation of citopatic effect (CPE). Initial concentrations of 6,0 to 7,0 x 10 4 cells/cm' were the best for the CRFK culture on microplates, using L-15 4 media with 5% of FBS at 37°C without CO2 atmosphere. For the replication of CCV sample K-378-20 the Best conditions were using pH between 5,0 and 7,0, adsoption time of 90 minutes, with formation of 90% of CPE in three days in A-72 and five days in CRFK, obtainning the average of 10 5 DICC50/25ul of infectant titer with reading best time of 72 to 96 hours after inoculation. Through the use of immunodifusion technique in agar gel(IDAG) it was seen the presence of 29 seras (19%) positive for the CCV K-378-20 in samples of 157 canine seras collected in Belo Horizonte in period before the commercialization of the CCV vaccines in the Brasil. |
| Subject: | Coronavirus Diagnostico Cão Doenças |
| language: | Português |
| Publisher: | Universidade Federal de Minas Gerais |
| Publisher Initials: | UFMG |
| Rights: | Acesso Aberto |
| URI: | http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8QSMNN |
| Issue Date: | 27-May-1994 |
| Appears in Collections: | Dissertações de Mestrado |
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