Caracterização estrutural de polissacarídeos obtidos do corpo de frutificação e cultivo submerso de Agaricus bisporus

Abstract

Resumo: Polissacaideos de basidiomicetos despertam grande interesse por apresentarem diversas propriedades terapeuticasO. A estrutura quimica destes biopolimeros possui um importante papel na atividade biologica dos polissacarideos. O presente trabalho teve por objetivo elucidar a estrutura quimica de alguns polissacarideos presentes no corpo de frutificacao, bem como os obtidos por meio do cultivo submerso Agaricus bisporus. Buscou tambem verificar os efeitos antinociceptivos e antiinflamatorios de uma glucana isolada do corpo de frutificacao deste organismo. O corpo de frutificacao do basidiomiceto seco, moido e deslipidificado foi submetido a extracoes aquosas a frio e a quente. O extrato obtido do cultivo submerso foi submetido a um processo de recuperacao dos exopolissacarideos (EPS). Os extratos foram submetidos a precipitacao com etanol e posteriormente foram submetidos aos processos de purificacao por congelamento e degelo, precipitacao com solucao de Fehling, extracao com DMSO e dialise por membranas de diferentes porosidades, de maneira sequencial. A partir destes processos foram purificadas e caracterizadas diferentes estruturas. A fracao SSCW obtida pela extracao aquosa a frio apresentou-se homogenea e composta por manose, galactose e glucose. Analises espectroscopicas e de metilacao sugerem que essa molecula apresenta cadeia principal constituida de £]-D-Glcp ligadas (1„_6), sendo que as unidades podem estar substituidas em O-3 por unidades de Galp O-6-substituidas por unidades de Galp O-6-substituidas por terminais nao redutores de ƒÒ-D-Glcp ou por unidades de Glcp O-3-substituidas por terminais nao redutores de ƒÒ-D-Glcp. A fracao SDPHW, obtida da extracao aquosa a quente, seguida por extracao com DMSSO, apos analises demonstrou ser uma ƒÒ-glucana linear, com ligacoes do (1„_6). Este polissacarideo apresentou um efeito analgesico e antiinflamatorio significativo com baixas doses quando avaliado em teste de contracao muscular induzida por acido acetico em camundongos. Os oligossacarideos produzidos a partir desta molecula tambem foram testados, porem seu efeito para a mesma atividade testada foi inferior ao da glucana integra. O cultivo em meio submerso foi realizado com o meio de cultivo Czapeck, o qual, apos testado com outros dois meios, promoveu melhores condicoes para o desenvolvimento do organismo. A fracao SSEPS foi obtida a partir da recuperacao dos exopolissacarideos produzidos durante o cultivo e purificada por uma serie sequencial de dialise em membranas com limite de exclusao por tamanho. Apresentou uma molecula heterogenea, composta de fucose, manose, galactose e glucose. A analise desta molecula, apesar de impura, sugere que esta molecula possa ser uma heterogalactana.

Abstract: The object of this study was to elucidate the chemical structures of some polysaccharides extracted from the fruiting bodies of Agaricus bisporus, as well as polysaccharides obtained by submerged culture. The dried, milled and delipidified basidiomycete was submitted to aqueous extraction (cold and hot). The extract obtained from the submerged culture was submitted to a process of recovering exopolysaccharides (EPS). These extracts were then submitted to ethanol precipitation, and the resulting polysaccharide extracts were submitted successively to a freeze-thawing process, precipitation with Fehling solution, DMSO extraction and dialysis with membranes of different Mr cut-off. Fraction SSCW, obtained from the cold water extraction, was composed of mannose, galactose and glucose. Spectroscopic and methylation analysis suggest that this molecule has a main chain composed of £]-D-Glcp (1„_6)-linked, substituted at O-3 by O-6-substituted Galp units linked to non-reducing ends of ƒÒ-D-Glcp. Fraction SDPHW, from the hot water extraction, was followed by a DMSO extraction, which, after analysis, was characterized as a linear ƒÒ-glucan, (1„_6)-linked. This polysaccharide demonstrated a positive effect as an analgesic and also induced an antiinflammatory response at low dosages, when analyzed by a test of abdominal constriction induced by acetic acid in mice. Oligosaccharides obtained from this molecule were also testes, however proving to have a less significant effect. The submerged culture was accomplished utilizing Czapeck medium, which, after tests with two other mediums, promoted better conditions for the organisms¡¦ growth and development. Fraction SSEPS was recovered from the medium extract obtained when the submerged culture was carried out. The exopolysaccharide produced during cultivation was submitted to a purification process by a sequence of dialysis with size exclusion membranes (cut-off). After analysis this fraction remains heterogeneous, however, it suggests the presence of a heterogalactan.