Desenvolvimento de biomaterial a partir de matriz amniótica humana
Resumo
Resumo: A membrana amniótica tem sido estudada como possível biomaterial na Medicina Regenerativa, sobretudo de uso externo. Os protocolos são controversos entre os métodos descelularização e manutenção da integridade de seus componentes. Objetivo: desenvolver um biomaterial a partir de matriz amniótica humana. Material e Métodos: Realizado protocolo modificado de placenta humana a base detergentes iônicos para remoção de todos os componentes celulares da membrana amniótica. Placentas obtidas de parto cesáreo de gestantes saudáveis e concepto à termo (n = 12) foram divididas aleatóriamente em dois fragmentos cada e tratadas com dióxido de cloro estabilizado 8% (v/v) por 20 minutos. Posteriormente foi utilizado 0,01% (v/v) dodecil sulfato de sódio e deoxicolato de sódio a 37° C por 24 horas. Foram realizados testes microbiológicos e de endotoxinas. As propriedades biomecânicas da membrana foram determinadas utilizando ensaios de tração biaxial. As análises histológicas foram avaliadas por microscopia óptica: HE e imunofluorescência para laminina e por microscopia eletrônica de varredura. Testes de biocompatibilidade foram realizados; "in vivo", através de implante no miocárdio de ratos e "in vitro" por semeadura de células e cultivo. Realizou-se a esterilização por irradiação gama. Resultados: A matriz celular foi descelularizada de modo eficiente e com a descontaminação satisfatória. Os componentes estruturais da matriz foram preservadas, não houve redução significativa na resistência à tração, extensibilidade e elasticidade após a descontaminação e descelularização. Foi demonstrada a biocompatibilidade através crescimento celular sobre a matriz aminiótica e da ausência de reação inflamatória após implante no miocárdio. Conclusão: Matriz celular descelularizada padronizada para uso e testes de aplicação de Biomaterial como implante. Abstract: The amniotic membrane has been studied as a potential biomaterial in regenerative medicine, mainly for external use. The protocols are controversial among the removal of all cells decellularization and maintaining the integrity of its components. Purpose: develop a biomaterial from human amniotic fluid matrix. Material and methods: the human placenta membrane detergent-based ionic protocol was modified to remove all cellular components of the amniotic membrane. Placenta membranes from childbirth of pregnant women healthy and elective by caesarian section, concepto to term (N= 12) were divided randomly into two fragments each and treated with stabilized chlorine dioxide 8 (v/v) for 20 minutes. It was later used 0.01 (v/v) sodium dodecyl sulfate and sodium deoxicolato at 37° C for 24 h. Microbiological tests were performed and endotoxins. The biomechanical properties of the membrane were determined using biaxial tensile tests. The histological analyses were evaluated by optical microscopy: HE and immunofluorescence to laminin and by scanning electron microscopy. Biocompatibility tests were conducted; in vivo through implant on myocardium of rats "in vitro" and "in vivo" by cell seeding and cultivation. Continue with gamma-irradiation sterilization Results: the cellular matrix decellularized was efficiently and with satisfactory decontamination. The structural components were preserved; there was no significant reduction in tensile strength, extensibility, and elasticity after the removal of cells decontamination and decellularization. It was demonstrated the biocompatibility with cell growth on the aminiotic array and the absence of inflammatory reaction after implant on the myocardium. Conclusion: Cellular matrix decellularizaded standardized tests for used and application of Biomaterial as implant.
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