Contributo para o estudo da caracterização genética de estirpes portuguesas de Echinococcus granulosus

Abstract

A hidatidose/equinococose é uma zoonose causada pelo céstode Echinococcus granulosus, juntamente com as suas variantes específicas denominadas de genótipos. Estão descritos 11 genótipos diferentes sendo que alguns destes já obtiveram o estatuto de novas espécies de Echinococcus e outras foram rearranjadas em complexos crípticos de espécies. O ciclo de vida do parasita é maioritariamente doméstico, tendo canídeos como hospedeiros definitivos e pequenos ruminantes e gado bovino como hospedeiros intermediários. O Homem é considerado um hospedeiro acidental. Embora a hidatidose/equinococose seja um problema de Saúde Pública em Portugal, existem poucos dados epidemiológicos sobre a infecção por este parasita e esses são apenas referentes a alguns hospedeiros intermediários. O principal objectivo deste trabalho é caracterizar geneticamente as amostras de Echinococcus obtidas em Portugal e estudar as relações filogenéticas destas com as amostras descritas em todo o mundo. Foram obtidas 211 amostras provenientes de matadouros portugueses, sendo 175 de ovinos, 3 de caprinos e 32 de bovinos. Foi ainda obtida uma amostra de um humano. Foram ainda utilizadas neste estudo três amostras provenientes de búfalos de Itália e duas amostras provenientes de ovinos do Brasil. Com as amostras férteis (n=72) foi feita a caracterização molecular para fragmentos de genes mitocondriais. A análise molecular das amostras de fígado, rim, pâncreas e pulmão, identificou a maior parte como pertencendo ao complexo G1-G3 de E. granulosus sensu stricto. Uma amostra foi identificada como E. canadensis genótipo G7. Com base nas sequências concatenadas dos genes cox1+ATP6+rrnL+rrnS (~2600pb) foi efectuada inferência filogenética a qual demonstrou probabilidade de segregação de três amostras portuguesas juntamente com sequências de referência do genótipo G3 do E. granulosus s.s.. Foi observada uma elevada fertilidade (~30%) nos quistos hidáticos provenientes de ovinos, tendo um elevado potencial infeccioso para os diversos hospedeiros intermediários, informação que está de acordo com o observado com outros estudos realizados na Europa. As 71 amostras portuguesas identificadas como pertencentes ao complexo de genótipos G1-G3 estão dispersas no Centro e Sul de Portugal, sendo este o complexo genético mais comummente encontrado nos animais de pastorícia e no gado bovino. Foi identificada uma amostra de bovino como pertencendo ao genótipo G7 do complexo E. canadensis que pode ser um alerta para a possibilidade de transmissão deste genótipo entre o gado bovino, facto que ainda não tinha sido descrito até à actualidade. Foi também efectuada análise filogenética com base em dois fragmentos de genes nucleares que revelaram resultados semelhantes aos obtidos com a análise efctuada com os fragmentos de genes mitocondriais, revelando a presença de uma amostra que segregava juntamente com o complexo E. canadensis e todas as outras amostras encontravam-se dentro do complexo E. granulosus s.s. genótipos G1-G3. A zona sul de Portugal (Alentejo), considerada como hiperendémica, continua a ter bastantes situações de abate de animais a nível doméstico, normalmente sem controlo veterinário. Assim a existência de mais estudos epidemiológicos e moleculares envolvendo outros matadouros, com maior abrangência a nível nacional e contemplando outros possíveis hospedeiros, permitiria evidenciar a situação epidemiológica do E. granulosus s.s. no país. Também seria importante a existência de estudos em amostras humanas para uma melhor implementação dos programas de Saúde Pública e para uma opção mais eficaz na escolha de tratamentos para a parasitose.

Cystic echinococcosis is a zoonosis caused by the tapeworm Echinococcus granulosus, with its specie variabilities known as genotypes, characterized in 11 different genotypes. Some of these became new species and others were rearranged in complex cryptic species. The lifecycle of the parasite is mainly domestic, requiring dogs as definitive hosts and livestock species as intermediate hosts. Humans are considered accidental hosts. Although cystic echinococcosis is a public health problem in Portugal, the rare data available concerns only infection in intermediate hosts. The aim of this work is to do a genetic characterization of Echinococcus samples in Portugal and evaluate its phylogenetic relationships worldwide. A slaughterhouse survey was conducted to assess prevalence and perform the molecular characterization of E. granulosus in sheep, cattle, goats and human samples. For the survey 211 samples were obtained, namely 175 from sheep, 3 from goats, 32 from cattle and 1 human. Also were used 3 samples form Italian buffalos and 2 samples from Brazilian sheep Molecular analyses based on mitochondrial genes identified genotypes G1- G3 of E. granulosus sensu stricto in almost all livers, pancreas, kidneys and lung samples. One sample was identified as G7 genotype of E. canadensis. Based on the concatenated sequences of cox1+ATP6+rrnL+rrnS (~2600 bp), the phylogenetic trees have shown the probability of segregation, showing that three portuguese samples were segregated with G3 genotype of E. granulosus sensu stricto. The high (30,0%) cyst fertility observed in sheep argues for the potential contribution of sheep to the lifecycle of E. granulosus sensu stricto, like previous observations in Europe. The 71 Portuguese samples identified as G1-G3 genotypes are dispersed in the center and south of Portugal and are the dominant genetic cluster in pastoral and livestock animals. The identification of a cattle sample as G7 genotype of E. canadensis alerts us to the transmission of the G7 genotype to cattle. This is a new finding not known until now. The nuclear genes analysis sowed similar phylogenetic trees revealing a sample segregated with E. canadensis complex and the other samples segregated with the E. granulosus s.s. genotypes G1-G3. The souththern part of Portugal, considered having a hyperendemic situation, still has a high number of slaughtered animals at home, usually without veterinary inspection. Further extensive slaughterhouse surveys with molecular identification also involving other slaughterhouses, are essential to obtain a better overview of the epidemiological situation of E. granulosus sensu lato in the country. In addition, human studies are relevant to better improve public health programs and treatments.