면역억제제가 면역감작 후 T세포의 Foxp3+세포와 IL-17+ 세포로의 분화와 증식에 미치는 영향

Abstract

서론: T 세포는 면역반응의 발생과정 중 다양한 역할은 하며 이 들 중 Treg(CD4+CD25+Foxp3+)세포와 Th17(CD4+CD25+IL-17+)세포는 각각 면역반응의 억제화 활성화에 관여하는 중요한 세포이다. Treg세포와 Th17세포에 대한 선택적인 억제작용을 통해 면역관용의 유도를 얻을 수 있다. 본 연구에서는 다양한 면역억제제가 두 세포에 미치는 영향을 분석하여 효율적인 면역억제제에 대해 알아보았다. 방법: C57BL/6 마우스의 비장으로부터 CD4+CD25- T 세포를 분리하였다. BALBc 마우스의 비장으로부터 림프구를 분리하여 방사선을 조사한 후 동종면역자극에 사용하였다. 분리된 세포는 응답세포(C57BL/6) : 자극세포(BALBc)의 비율을 1:4로하여 CO2 배양기에서 37℃로 배양하였다. 각 세포들은 Mycofenolate mofe-til(10 ng/ml, 100 ng/ml, 1000 ng/ml), Tacrolimus, Sirolimus(1 ng/ml, 10 ng/ml, 100 ng/ml)을 각각 첨가한 배지에서 세포배양을 시행하였다. 각각의 군은 다시 IL-2, TGF-β 를 첨가하여 Treg세포의 분화를 촉진하는 군과 TGF-β, IL-6, neutral INF-γ 그리고 IL-4를 첨가하여 Th17세포의 분화는 촉진하는 군으로 나누었다. Treg세포는 3일 Th17세포는 5일간 배양 후 Foxp3, RORγ-T, IL-17의 발현을 유세포분석을 통해 측정하였다. 결과: Mycofenolatge mofetil은 농도 증가에 따라 Treg세포와 Th17세포의 분화를 동시에 억제하였다. 특히 1000 ng/ml군에서는 두 세포의 발현이 완전히 억제되었다. Tacrolimus는 모든 농도에서 두 세포의 활성을 모두 억제하였다. 단 약제의 투여를 시점을 24시간 지연한 경우 Treg세포이 분화억제가 동시 투여군에 비해 억제의 정도가 낮았고 특히 Treg세포의 분화가 동시 투여군에 비해 높게 나타났다. Sirolimus는 다른 면역억제제에 비해 두 세포의 억제가 강하게 나타나지 않았다. Sirolimus는 다른 두 면역억제제에 비해 세포의 증식의 지표로 볼 수 있는 전구세포비율 또한 높게 나타났다. 결론: Mycofenolate Mofetil 과 Tacrolimus는 면역감작 후 T세포의 Treg세포 및 Th17세포로의 분화 및 증식을 억제하였다. 하지만 tacrolimus군에서 약물의 투여를 지연하면 Treg세포의 활성이 동시 투여한 군에 비해 증가하는 양상을 보여 면역억제제의 투여시기를 적절하게 조절하여 면역세포의 분화를 조절할 수 있는 가능성을 보였다. 반면 sirolimus는 두 세포에 대한 억제효과가 크지 않았으며 세포의 분화와 증식을 다른 면역억제제와 비교하여 높게 유지하였다. 이는 sirolimu가 Treg및 Th17세포에 대한 직접 억제와는 다른 방법으로 면역관용을 유지하는 것으로 판단된다. 이들 결과는 모두 시험관환경에서 이루어진 것으로 생체 내에서 반응을 모두 대변할 수는 없다. 이들 결과를 토대로 추가적인 연구가 필요하다.