Διερεύνηση της σημασίας των υποδοχέων των φυσικών κυτταροκτόνων (ΝΚ) κυττάρων ως συστήματος αλλοαναγνώρισης κατά την κύηση

Abstract

Natural Killer (NK) cells consist the main leukocyte population of the deciduawhere they are in close contact with extravillus cytotrophoblast. Their functionsare regulated by a heterocladic repertoire of surface activating and inhibitoryreceptors. A highly polymorphic family of these receptors, the KillerImmunoglobulin like receptors (KIRs), has as their ligands HLA class I molecules(HLA-C, E, G) which are the only HLA molecules expressed on extravilluscytotrophoblast. The interactions of maternal KIR receptors with their ligands,fetal HLA-C molecules, may play a definitive role in reproduction successproviding an immunogenetic allorecognition system.In this study, KIR gene typing was performed in 42 women who underwentvacuum uterine curettage for therapeutic termination of 1st trimester missedpregnancy (Group A) and KIR repertoire was analyzed in combination with theHLA-C allotypes of missed embryos. The results were compared to those of acontrol group of 51 women (Group M) [16 women who underwent vacuum uterine curettage for elective termination of normal pregnancy (Subgroup D) and35 fertile women with their babies (Subgroup C)]. For Group A and Subgroup D,maternal KIR typing by Luminex and trophoblastic HLA-C typing by PCR-SSPwas performed using DNA extracted from decidual segments and chorionic villirespectively, while for Subgroup C, DNA from maternal peripheral blood andcord blood was used. HLA-C alleles were grouped as C1 and C2 based on adimorphism at position 80 (C1 group=C*01, 03, 07, 08, 12, 13, 14, 1601/4 andC2 group= C*02, 04, 05, 06,15, 1602, 17, 18). KIR2DL2/3 inhibitory receptorsrecognize group C1 allotypes, while inhibitory KIR2DL1 and activating KIR2DS1receptors recognize group C2 allotypes.According to the results: a) The percentage of women in Group A lackingKIR2DL1 gene was found increased compared to the controls (26,2% vs 2.0%OR 0,0564, 95% CI 0,006-0.458, p=0,007), b) The women in Group A werefound to possess fewer inhibitory KIR genes encoding for inhKIR receptorsrecognizing trophoblastic HLA-C allotypes than the Group M women (66,7% vs 52,9%), c) A percentage of Group A women was possessing inhibitory KIRslacking epitope matching with trophoblastic C molecules, while similarcombinations were not observed in the control group (9,5% vs 0,0% p=0.038), d)Cases possessing the activating combination KIR2DS1-C2 in the absence of inhibitory KIR-C combinations were observed only in Group A (4,8%vs 0.0%), e)The percentage of cases possessing the KIR2DL1-C2 combination, which isassociated with increased inhibition, was found to be lower in Group A (16.7% vs27.5%)The above results support the hypothesis that maternal KIR / trophoblastic HLACinteractions are involved in the function of an NK cell-mediated allorecognitionsystem in pregnancy. It seems that, in cases of abortion, activating maternalKIR/trophoblastic HLA-C combinations prevail at the feto-maternal interface andmay allow damage of trophoblast by activated NK cells.

Φυσικά κυτταροκτόνα (ΝΚ) κύτταρα αποτελούν τον κύριο κυτταρικό πληθυσµότου φθαρτού (≈70%) όπου βρίσκονται σε άµεση επαφή µε την εµβρυϊκήςπροέλευσης εξωλαχνώδη κυτταροτροφοβλάστη. Οι λειτουργίες τους ρυθµίζονταιαπό ένα ετεροκλαδικό ρεπερτόριο ενεργοποιητικών και ανασταλτικώνυποδοχέων που φέρουν στην επιφάνειά τους. Μεταξύ αυτών, είναι οι ιδιαίτεραπολυµορφικοί υποδοχείς της οικογένειας των KIR, οι οποίοι έχουν ως συνδέτεςτους HLA τάξης Ι µόρια (HLA-C ή G) που είναι τα µόνα τάξης Ι µόρια πουεκφράζονται στην τροφοβάστη. Οι αλληλεπιδράσεις των KIR υποδοχέων τωνΝΚ κυττάρων του φθαρτού µε τα HLA-C µόρια της τροφοβλάστης µπορεί ναπαίζουν έναν καθοριστικό ρόλο στην εξέλιξη της κύησης, λειτουργώντας ωςανοσογενετικό σύστηµα αλλοαναγνώρισης.Στην παρούσα µελέτη, καταγράφηκε το γονιδιακό ρεπερτόριο των KIRυποδοχέων σε 42 γυναίκες που υπεβλήθησαν σε εκκενωτική απόξεση µήτραςλόγω αποβολής πρώτου τριµήνου (Οµάδα Α) και αναλύθηκαν οι συνδυασµοίτων µητρικών KIR µε τους HLA-C αλλοτύπους των εµβρύων που απεβλήθησαν.Τα αποτελέσµατα συγκρίθηκαν µε τα αντίστοιχα οµάδας 51 γυναικών (Οµάδα Μ),οι οποίες προέβησαν σε επιθυµητή διακοπή της κύησης (Οµάδα ∆=16) ή είχανεπιτυχή εγκυµοσύνη (Οµάδα Φ=35). Για την KIR και την HLA-C γονιδιακήτυποποίηση χρησιµοποιήθηκε DNA που αποµονώθηκε αντίστοιχα από κύτταραφθαρτού και τροφοβλάστης του υλικού της απόξεσης (Οµάδες Α και ∆) ή DNAαπό περιφερικό αίµα των γυναικών και οµφαλοπλακουντιακό αίµα των παιδιώνπου γέννησαν (Οµάδα Φ). Τα HLA-C µόρια οµαδοποιήθηκαν ανάλογα µε τοαµινοξύ που υπάρχει στη θέση 80 της α1 περιοχής του µορίου τους σε: α) οµάδαC1 (HLA-C*01, C*03, C*07, C*08, C*12, C*13, C*14, C*1601/4) και β) οµάδα C2(HLA-C*02, C*04, C*05, C*06, C*15, C*1602, C*17, C*18). Η HLA-C1 οµάδααναγνωρίζεται από τους KIR2DL2/3 ανασταλτικούς υποδοχείς, ενώ η HLA-C2οµάδα από τον KIR2DL1 ανασταλτικό και KIR2SD1 ενεργοποιητικό υποδοχέα.Σύµφωνα µε τα αποτελέσµατα, οι γυναίκες της οµάδας Α σε σχέση µε τιςγυναίκες της οµάδας Μ: α) είχαν στατιστικά σηµαντικά ελαττωµένη παρουσία τουγονιδίου για τον ανασταλτικό υποδοχέα KIR2DL1 (26,2% έναντι 2,0%, OR0,0564, 95%CI 0,006-0.458, p=0,007), β) Εµφάνιζαν ελαττωµένο ρεπερτόριοανασταλτικών KIR υποδοχέων που έχουν ως συνδέτες HLA C µόρια (66,7%έναντι 52,9%), γ) Είχαν σε ποσοστό 9,5% ανασταλτικούς ΚIR υποδοχείς χωρίςεπιτοπική συµβατότητα µε µόρια-συνδέτες της τροφοβλάστης, ενώ παρόµοιοισυνδυασµοί δεν βρέθηκαν στις γόνιµες γυναίκες (9,5% έναντι 0,0% p=0.038), δ)Εµφάνιζαν µόνο τον ενεργοποιητικό συνδυασµό KIR2DS1-C2, χωρίς κανέναανασταλτικό συνδυασµό (4,8%, έναντι 0,0%) και ε) Εµφάνιζαν µειωµένησυχνότητα του ισχυρά ανασταλτικού συνδυασµού KIR2DL1-C2 (16,7% έναντι27,5%).Τα ευρήµατα αυτά υποστηρίζουν την υπόθεση ότι οι αλληλεπιδράσεις KIR/HLACλειτουργούν ως σύστηµα αλλοαναγνώρισης που επηρεάζει την εξέλιξη τηςκύησης. Φαίνεται ότι οι αποβάλλουσες γυναίκες έχουν συνδυασµούςανασταλτικών και ενεργοποιητικών KIR υποδοχέων που η αλληλεπίδρασή τουςµε τα συγκεκριµένα HLA-C του φαινοτύπου του εµβρύου έχουν την δυνατότητανα θέσουν τα ΝΚ κύτταρα σε κατάσταση ενεργοποίησης οδηγώντας σε διακοπήτης κύησης.