Έκφραση των βιοσυνθετικών ενζύμων των κυστεϊνυλικών λευκοτριενίων στο φαρυγγικό λεμφικό ιστό παιδιών με αποφρακτική άπνοια στον ύπνο

Abstract

Expression of Leukotriene Biosynthetic Enzymes in Tonsillar Tissue of Children With Obstructive Sleep ApneaA Prospective Nonrandomized StudyIMPORTANCE Cysteinyl leukotrienes (CysLTs) potentially promote adenotonsillar hypertrophy in children with obstructive sleep apnea (OSA). Previous studies have identified CysLTs and their receptors in tonsillar tissue from children with OSA.OBJECTIVE To demonstrate expression of the leukotriene biosynthetic enzymes 5-lipoxygenase (5-LO), 5-lipoxygenase activating protein (FLAP), leukotriene A4 hydrolase (LTA4H), and leukotriene C4 synthase (LTC4S) in T and B tonsillar lymphocytes from pediatric patients with OSA. It was hypothesized that children with OSA have greater expression of biosynthetic enzymes for CysLTs (5-LO, FLAP, and LTC4S) in their tonsillar tissue than do children with recurrent tonsillitis (RT), who were enrolled as controls.DESIGN, SETTING, AND PARTICIPANTS This prospective, nonrandomized study was performed at a tertiary care university hospital on 13 children with OSA and adenotonsillar hypertrophy undergoing adenotonsillectomy and 12 children without OSA also undergoing tonsillectomy for RT. Tonsillar tissue from children with OSA or RT was examined for 5-LO, FLAP, LTA4H, and LTC4S expression under real time-quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR), flow cytometry (FC), and confocal laser scanning microscopy (CM).MAIN OUTCOMES AND MEASURES Expression of biosynthetic enzymes for CysLTs (5-LO, FLAP, and LTC4S) was the main outcome measure. Patients with OSA and control patients with RT were compared for numbers of copies of 5-LO, FLAP, and LTC4S messenger RNA (by RT-qPCR) in T or B tonsillar lymphocytes and proportions of CD3+ or CD19+ tonsillar lymphocytes that expressed 5-LO, FLAP, and LTC4S (by FC).RESULTS Leukotriene biosynthetic enzymes are expressed in tonsillar lymphocytes, and the previously reported detection of CysLTs in tonsillar tissue from children with OSA may be attributed to endogenous synthesis. Enhanced expression of LTC4S is a potential target for pharmacologic interventions in OSA.

Έκφραση των Βιοσυνθετικών Ενζύμων των Λευκοτριενίων σε Αμυγδαλικό Ιστό Παιδιών με Αποφρακτική Άπνοια Ύπνου Προοπτική Μη Τυχαιοποιημένη Μελέτη. ΣΗΜΑΣΙΑ. Τα κυστεϊνυλικά λευκοτριένια (CysLTs) προάγουν την υπερτροφία των αμυγδαλών και αδενοειδών εκβλαστήσεων σε παιδιά με αποφρακτική άπνοια ύπνου (OSA). Προηγούμενες μελέτες έχουν ανιχνεύσει CysLTs και υποδοχείς αυτών σε αμυγδαλικό ιστό παιδιών με OSA. ΣΚΟΠΟΣ. Η διερεύνηση της έκφρασης των βιοσυνθετικών ενζύμων των λευκοτριενίων 5-λιποξυγενάση (5-LO), πρωτεΐνη ενεργοποίησης της 5-λιποξυγενάσης (FLAP), υδρολάση του λευκοτριενίου Α4 (LTA4H) και συνθετάση λευκοτριενίου C4 (LTC4S) σε Τ και Β λεμφοκύτταρα από παιδιατρικούς ασθενείς με OSA. Υποτέθηκε ότι τα παιδιά με OSA παρουσιάζουν μεγαλύτερη έκφραση των βιοσυνθετικών ενζύμων των CysLTs (5-LO, FLAP, και LTC4S) στον αμυγδαλικό τους ιστό σε σύγκριση με τα παιδιά με υποτροπιάζουσες αμυγδαλίτιδες που συμπεριλήφθηκαν ως μάρτυρες. ΣΧΕΔΙΑΣΜΟΣ, ΧΩΡΟΣ ΚΑΙ ΣΥΜΜΕΤΕΧΟΝΤΕΣ. Η παρούσα, μη τυχαιοποιημένη μελέτη πραγματοποιήθηκε σε τριτοβάθμιο πανεπιστημιακό νοσοκομείο, σε 13 παιδιά με OSA και υπερτροφία αδενοειδών και αμυγδαλών που υποβλήθηκαν σε αδενοειδεκτομή και αμυγδαλεκτομή και 12 παιδιά χωρίς OSA τα οποία επίσης υποβλήθηκαν σε αδενοειδεκτομή και αμυγδαλεκτομή λόγω RT. Αμυγδαλικός ιστός από τα παιδιά με OSA και RT εξετάστηκε για την έκφραση των 5-LO, FLAP, LTA4H και LTC4S με ποσοτική αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης πραγματικού χρόνου (RT-qPCR), κυτταρομετρία ροής (FC) και συνεστιακή μικροσκοπία σάρωσης με laser (CM). ΚΥΡΙΑ ΚΑΤΑΛΗΚΤΙΚΑ ΣΗΜΕΙΑ ΚΑΙ ΜΕΤΡΗΣΕΙΣ. Η έκφραση των βιοσυνθετικών ενζύμων των λευκοτριενίων (5-LO, FLAP και LTC4S) ήταν το κύριο καταληκτικό σημείο. Οι ασθενείς με OSA και οι ασθενείς - μάρτυρες με RT συγκρίθηκαν ως προς τα αντίγραφα του αγγελιοφόρου RNA των 5-LO, FLAP και LTC4S (με RT-qPCR) σε Τ και Β λεμφοκύτταρα, καθώς και ως προς τα ποσά των CD3+ και CD19+ σε αμυγδαλικά λεμφοκύτταρα που εξέφρασαν 5-LO, FLAP και LTC4S (με FC). ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ. Αγγελιοφόρο RNA και για τα 4 ένζυμα ανιχνεύθηκε στα Τ και Β λεμφοκύτταρα και στις δύο ομάδες, και έκφραση όλων των βιοσυνθετικών ενζύμων αναδείχθηκε στους συμμετέχοντες και με OSA και με RT με FC. Οι ασθενείς με OSA διέφεραν από τους μάρτυρες ως προς τα ποσά (μέση τιμή [10η-90η ΕΘ] των LTC4S+ CD3+ T λεμφοκυττάρων (23.31% [8.64%-50.07%] έναντι 10.81% [3.48%-23.32%], αντίστοιχα) (Ρ = .01) και των LTC4S+ CD19+ B λεμφοκυττάρων (20.66% [14.62%-65.77%] έναντι 12.53% [2.87%-36.64%], αντίστοιχα) (P = .01) που ανιχνεύθηκαν με την FC. Ανοσοαντιδραστικότητα και για τα 4 ένζυμα ανιχνεύθηκε με CM στα Β λεμφοκύτταρα των ζωνών του μανδύα και στα Τ λεμφοκύτταρα των εξωλεμφοζιδιακών περιοχών. ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ ΚΑΙ ΣΥΣΧΕΤΙΣΗ. Τα βιοσυνθετικά ένζυμα των λευκοτριενίων εκφράζονται στα αμυγδαλικά λεμφοκύτταρα, και η προηγηθείσα αναφερόμενη ανίχνευση CysLTs στον αμυγδαλικό ιστό παιδιών με OSA μπορεί να αποδοθεί σε ενδογενή σύνθεση. Η αυξημένη έκφραση της LTC4S αποτελεί πιθανό στόχο για φαρμακευτικές παρεμβάσεις στην OSA.