Caractérisation de sondes codant pour l'alcool déshydrogénase
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Publication date
1991Author(s)
Lévesque, Johanne
Subject
Alcool déshydrogénaseAbstract
La présente étude avait pour objectif la caractérisation de l'alcool déshydrogénase (ADH; EC 1.1.1.1) ainsi que la détermination du niveau de régulation de l'ADH de classe II chez le hamster chinois. Pour ce faire, certains concepts de biologie moléculaire tels que l'hybridation ainsi que la mesure d'activité enzymatique ont été utilisées sur différentes lignées cellulaires. La première étape consistait à hybrider l'ARN extrait des différentes lignées cellulaires avec la sonde codant pour l'ADH de classe II de nature humaine, puisque les cellules en culture de hamsters utilisées expriment exclusivement cette classe d'ADH. Des cellules humaines sont utilisées en guise de contrôles positifs. Cependant, n'ayant obtenu, suite à de nombreuses hybridations de ce genre, que de très faibles signaux, une nouvelle sonde codant pour l'ADH de classe Iβ humaine a été utilisée. Des signaux légèrement plus intenses sur l'autoradiographie ont été obtenus de façon reproductible, résultat étonnant et non sans intérêt. En effet, ceci suggère que l'alcool déshydrogénase de hamsters, est de classe I au niveau de la séquence d'ADN, et de type II au niveau de l'activité enzymatique. Afin de vérifier cette nouvelle hypothèse; premièrement, nous avons reconfirmé, via une analyse enzymatique, si les cellules exprimaient bel et bien l'alcool déshydrogénase de classe II. Ceci a donc été démontré pour les diverses lignées cellulaires, par des gels d'isoélectrofocalisation (IEF) révélés par activité enzymatique en présence ou en absence d'inhibition de l'activité par le pyrazole. Deuxièmement, une analyse pour vérifier si le même locus génétique chez le hamster code pour l'alcool déshydrogénase de classe I et II a débuté. Les résultats obtenus n'ont pu être concluants. L'étude de l'alcool déshydrogénase du hamster par hybridation d'ADN et d'ARN n'ayant pu être approfondie (vu la non spécificité des sondes et du spécimen étudié) permettra toutefois d'orienter les recherches futures sur ce sujet. Ce projet permettra également de caractériser et de comparer les sondes ADH humaines avec celles du hamster chinois.
Collection
- Sciences – Mémoires [1808]