Efeito do ácido linoléico conjugado na sobrevivência pós criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro

Laila Succar Teixeira do Rosario Rahme

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Type:	Dissertação de Mestrado
Title:	Efeito do ácido linoléico conjugado na sobrevivência pós criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro
Authors:	Laila Succar Teixeira do Rosario Rahme
First Advisor:	Alan Maia Borges
First Co-advisor:	Luiz Sergio de Almeida Camargo
metadata.dc.contributor.advisor-co2:	Marc Roger Jean Marie Henry
First Referee:	Moysés dos Santos Miranda
Second Referee:	Vicente Ribeiro do Vale Filho
Abstract:	O congelamento dos embriões bovinos produzidos in vitro ainda é um ponto crítico para a melhoria dos resultados da biotécnica, uma vez que permite o aproveitamento comercial dos embriões excedentes. A maior quantidade de lipídeos no citoplasma das células embrionárias implica em redução na qualidade embrionária e no potencial de congelabilidade dos mesmos. O presente experimento teve por objetivo testar a influência da adição do ácido linoléico conjugado trans-10, cis-12 (CLA) e/ou soro fetal bovino ao meio de cultivo sobre a concentração de lipídeos intracitoplasmáticos em embriões bovinos produzidos in vitro. Foram usados quatro meios de cultivo: tratamento 1 (T1 - controle, 443 oócitos) meio SOF com soro fetal bovino; tratamento 2 (T2 - 439 oócitos) - meio SOF com soro fetal bovino associado ao CLA; tratamento 3 (T3- 500 oócitos) - meio SOF sem soro fetal bovino; e tratamento 4 (T4 - 496 oócitos) - meio SOF acrescido de CLA. Doze mórulas de cada tratamento foram fixadas no quinto dia de cultivo (D5) para análise da concentração de lipídios citoplasmáticos utilizando-se o corante Nile Red. No sétimo dia de cultivo (D7), blastocistos expandidos foram vitrificados utilizando-se a Open Pulled Straw (OPS) e o meio de cultivo congelado para análise da concentração de peróxidos (H2O2) liberados no meio, utilizando-se o kit QuantiChromTM Peroxide Assay Kit (DIOX-250). Após 15 dias vitrificados, os embriões foram aquecidos e as taxas de reexpansão e eclosão foram analisadas. Não houve diferença estatística nas taxas de clivagem (46,0%; 51,2%; 49,8%; 51,9% para T1; T2; T3 e T4, respectivamente). Embriões cultivados na presença de soro fetal bovino apresentaram taxa de produção de blastocistos superior (T1=24,2% e T2=24,2%) em relação aos embriões cultivados em meio sem soro (T3=16,6% e T4=15,0%). As mórulas cultivadas na presença de soro (T1) apresentaram aumento significativo de gotas lipídicas em relação aos demais tratamentos (P < 0,05). As taxas de reexpansão e eclosão foram iguais para os quatro tratamentos após vitrificação. Não houve diferença na concentração de peróxidos (H2O2) liberados no meio de cultivo dos quatro tratamentos. Conclui-se que a presença de soro fetal bovino aumenta a taxa de produção de blastocistos, mas eleva a concentração de gotas lipídicas nos embriões. A adição de CLA no meio de cultivo diminui a concentração de lipídeos nos embriões, mas não aumenta a taxa de eclosão dos mesmos após vitrificação. A presença de CLA no meio não aumentou a concentração de H2O2
Abstract:	Cryopreservation of bovine embryos produced in vitro is a critical point for the improvement of biotechnical techniques, since it allows the commercial use of embryos. The greatest amount of lipids in the cytoplasm of embryonic cells implies a reduction in quality and freezability of embryos. The present experiment aimed to test the influence of the addition of trans-10, cis-12 conjugated linolei acid (CLA) and / or fetal calf serum to the culture medium on the concentration of intra-cytoplasmic lipids in bovine embryos produced in vitro. It was tested four different culture medium: treatment 1 (T1 - control, 443 oocytes) - SOF medium with fetal calf serum; treatment 2 (T2 - 439 oocytes) - SOF medium with fetal calf serum associated with CLA; treatment 3 (T3-500 oocytes) - SOF medium without fetal calf serum; and treatment 4 (T4 - 496 oocytes) - SOF medium supplemented with CLA. Twelve morulae of each treatment were fixed in the fifth day of culture (D5) for analyzing the concentration of cytoplasmic lipid using the dye Nile Red. On day seven of culture (D7), expanded blastocysts were vitrified using the Open Pulled Straw (OPS), and the culture medium was frozen for analyzing the concentration of peroxide (H2O2) released into the medium, using the kit QuantiChromTM Peroxide Assay Kit (DIOX-250). After 15 days, vitrified embryos were warmed and re-expansion and hatching rates were analyzed. There was no statistical differences (P>0.05) in cleavage rates (46.0%, 51.2%, 49.8%, 51.9% for T1, T2, T3 and T4, respectively). Embryos cultured in the presence of fetal calf serum presented higher rates of blastocysts production (T1 = T2 = 24.2% and 24.2%, respectively) than embryos cultured in serum free medium (T3 and T4 = 16.6% = 15,0%). Embryos cultured in the presence of serum (T1) had higher (P<0.05) increase of lipid droplets in relation to other treatments. The re-expansion and hatching rates were similar among treatments after vitrification. There was no differences (P>0.05) in the concentration of peroxide (H2O2) in the medium among treatments. In conclusion, the presence of fetal calf serum increased the blastocyst yield, but increased the concentration of lipid droplets in the cytoplasm of embryos. The addition of CLA in the medium reduced the concentration of lipids in embryos, but did not increase the hatching rates after vitrification. The presence of CLA in the medium did not increase the concentration of H2O2
Subject:	Bovino Embriões Criopreservação Reprodução animal Bovino Reprodução
language:	Português
Publisher:	Universidade Federal de Minas Gerais
Publisher Initials:	UFMG
Rights:	Acesso Aberto
URI:	http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8UHG53
Issue Date:	12-Apr-2012
Appears in Collections:	Dissertações de Mestrado

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