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Type:	Dissertação de Mestrado
Title:	Estudo da função do gene SmDimp de Schistosoma mansoni através da técnica de Complementação fenotípica em levedura.
Authors:	Ariadna Dias Almeida
First Advisor:	Elida Mara Leite Rabelo
First Referee:	Monica Bucciarelli Rodriguez
Second Referee:	Nelder de Figueiredo Gontijo
Abstract:	A esquistossomose é uma doença que afeta 200 milhões de pessoas em todo o mundo. Apesar dos esforços para controlar esta doença através do desenvolvimento de novos medicamentos ou vacinas, até o momento o número de pessoas afetadas permanece quase inalterado. A fim de melhorar o conhecimento sobre a biologia e aspectos relacionados com o desenvolvimento do parasito, ciclo de vida e de reprodução, o que poderia conduzir à concepção de novas drogas e / ou vacinas, projetos genoma têm sido desenvolvidos para este parasito. Um grande número de genes têm sido descobertos e na era pós-genômica, alguns genes têm sido escolhidos para ser melhor caracterizado. Um gene de S. mansoni envolvido no ciclo celular e apresentando homologia com genes de outras espécies, incluíndo seres humanos, foi selecionado para ser melhor caracterizado. Este gene em Saccharomyces cerevisiae está envolvido no processo de interação com o complexo do spliceosoma. A técnica de complementação fenotípica foi escolhida para determinar se o gene de S. mansoni apresenta a mesma função que o gene de S. cerevisiae. Já foi demonstrado que a supressão deste gene é letal na levedura, por isso, decidiu-se utilizar leveduras diplóides neste trabalho. A supressão do gene nas leveduras foi realizada pela ruptura de um dos alelos através de um evento de recombinação homóloga do gene Dib1, utilizando gene marcador autoxotópico HIS3. Os mutantes foram selecionados em placas contendo os nutrientes necessários exceto histidina. Para identificar o nocaute, os clones obtidos foram analisados por PCR de colônia usando iniciadores específicos. Leveduras nocauteadas para o Dib1 e transfectadas com os plasmídeos contendo o gene Dib1 da levedura (controles positivos), e o Dimp do S. mansoni, foram utilizados para ensaios de esporulação, para verificar se o gene de S. mansoni complementa a função gênica do seu ortólogo em S. cerevisiae. Após experimento de nocaute, 111 clones de leveduras foram obtidas, 45 destas colônias foram testadas por PCR, e destas 6 foram identificados como nocauteadas. Uma destas colônias, então, foi usada para ser transfectada com os plasmídeos construídos. Nenhuma esporulação foi observada em qualquer um dos plasmídeos recombinantes (Dib1 de levedura e Dimp de S. mansoni), sugerindo que a super expressão dos genes bloqueou a esporulação da levedura. O fato das levedura não esporularem quando se utiliza ambos os genes, SmDimp e Dib1 da levedura, pode indicar que eles exerçam função semelhante, nos respectivos organismos. No entanto, novos experimentos precisam ser realizados para esclarecer definitivamente esta questão. Assim, os genes devem ser clonados em plasmídeos com promotores de expressão basal. Desta forma, Espera-se que a esporulação ocorra em níveis basais tornando possível confirmar se o gene SmDimp de S. mansoni pode complementar a função de seu ortólogo na levedura.
Subject:	Levedos Parasitologia Processamento de RNA Nocaute gênico Shistosoma mansoni Complementação (Genética)
language:	Português
Publisher:	Universidade Federal de Minas Gerais
Publisher Initials:	UFMG
Rights:	Acesso Aberto
URI:	http://hdl.handle.net/1843/SAGF-8ACMLZ
Issue Date:	26-Jun-2009
Appears in Collections:	Dissertações de Mestrado

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