Orientador : Giberto da Assunção Fernandes

Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade Ciencias Medicas

Resumo: Centralmente aplicada, a Substância P (SP) interage com o sistema nervoso autônomo (SNA) e com o eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (IlliA). Sabendo-se que esses sistemas modulam a função imune inata e têm sido implicados na resposta inflamatória associada com doenças auto-imunes, os efeitos...

Resumo: Centralmente aplicada, a Substância P (SP) interage com o sistema nervoso autônomo (SNA) e com o eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (IlliA). Sabendo-se que esses sistemas modulam a função imune inata e têm sido implicados na resposta inflamatória associada com doenças auto-imunes, os efeitos da administração de SP intracerebroventricular (i.c.v.) na quantificação de linfócitos e na atividade citotóxica"natural killer" (NK) de células esplênicas foram estudados na Encefalomielite Alérgica Experimental (EAE), um modelo de estresse inflamatório crônico. Neste trabalho investigou-se a influência da SP e do seu antagonista sobre as subpopulações celulares CD3+, CD4+, CD8+, CDJNKR-PI+, CD3~-PI+, quantificadas por citometria de fluxo e a atividade imunológica citotóxica NK, obtida por ensaio de liberação de cromo radioativo CrSI, no curso desse processo inflamatório. A possibilidade de avaliar a atividade do eixo IlliA nessa doença foi verificada pelas dosagens hormonais séricas do hormônio adrenocorticotrófico (ACTH) e corticosterona, e da arginina vasopressina (A VP), na eminência média. Os resultados mostraram que na EAE houve um aumento no baço nos subtipos celulares CD3+ (64,2 :!: 0,8 %), CD4+ (59,6 :!: 0,6 %), CD8+ (14,5 :!: 0,5 %) e CDTNKR-PI + (8,8 :!: 0,3 %) às custas de uma atividade esplênica citotóxica NK (5,2 :!: 0,6 %) significativamente menor que nos controles normais [CD3+ (47,8 :!: 2,2 %), CD4+ (45,6 :!: 1,3 %), CD8+ (10,7 :!: 0,4 %), CD3NKR-PI+ (4,9 :t 0,4 %), NKac (8,9 :!: 0,7 %), CD3~-PI+ (1,6:!: 0,2 %) , ACTH (10,2 :!: 1,4 pg/rnl), corticosterona (2,2 :!: O ng/rnl)]. Esses dados foram correlacionados a um aumento dos níveis plasmáticos de ACTH (92,2 :!: 38,5 pg/rnl) e corticosterona (152,1 :!: 42,5 ng/rnl).
A administração de 20 nrnoles de SP aumentou a retenção de células CD4+ (5I,3:!: 1,7 %) e CD8+ (I5,0:!: 0,8 %) no baço, com um aumento da porcentagem de células CD3NKR-Pl+ (10,4 :!: 0,9 %) e conseqüente diminuição da citotoxicidade NKac (5,4 :!: 0,6 %) no pico dos sintomas clínicos, comparados aos controles salina [CD4+ (41,2 :!: 4 %), CD8+ (1I,8:!: 1,5 %), CD3NKR-PI+ (6,5:!: 1,7 %), NKac (7,6:!: 0,2 %), ACTH (47,1 :!: 6,1 pg/rnl), corticosterona (120,3 :!: 17,8 ng/rnl)]. Isto foi acompanhado por um decréscimo nos níveis dos hormônios adrenocorticotróficos (21,3 :f: 2,3 pg/rnl) e corticosterona (44,1 :f: 16,2 ng/mI).
As células CD3~-P1+ [antagonista + salina (0,5 :f: 0,04 %) e antagonista + SP (0,6:f: 0,1 %)], um outro tipo celular implicado na auto-imunidade, foram reduzidas pela injeção do antagonista da SP, quando comparadas ao grupo salina (1,3 :f: 0,1 %), sugerindo um papel para a SP no fluxo migratório desse tipo celular no baço. Concluindo, os dados obtidos neste trabalho sugerem que a SP influencia o eixo HHA , podendo também modular o tráfego celular linfocitário e a resposta imune no baço e, portanto, deve ser um elemento importante nos processos de modulação da EAE

Abstract: Substance P centrally injected (ICV) in rats acts on the autonomic nervous system and the hypotha1amic-pituitary-adrenal axis (HPA) to moduJate innate llmnune function and iDf1ammatory response in autoimmune diseases. The effects of modulation in migration and in natural killer cell...

Abstract: Substance P centrally injected (ICV) in rats acts on the autonomic nervous system and the hypotha1amic-pituitary-adrenal axis (HPA) to moduJate innate llmnune function and iDf1ammatory response in autoimmune diseases. The effects of modulation in migration and in natural killer cell activity of splenocytes in these systems were studied in experimental allergic encephalomyelitis (EAE) a model of autoimmune disease which acts as a chronic inf1ammatory stress. The migration characteristics observed by flow citometry were ofthe CD3+, CD4+, CD8+, CD3+m<R-Pl+ and NKT splenocyte subpopulations. The innate llmnune function measured was that of the cytotoxic NK activity measured by CrSI liberation assay in the peak of the inflammatory processo The hypothaJamic-pituitaryadrenal axis alterations were measured by quanti.fying the plasma hormone levels of adrenocorticotropic hormone (ACTH) and corticosterone and the median eminence values of arginine vasopressin. In this chronic inflammatory model was observed an increased retention in the spleen ofCD3+ (64,2:J: 0,8 %), CD4+ (59,6:J: 0,6 %), CD8+ (14,5:J: 0,5 %) and CD3+m<R.-Pl+ (8,8:J: 0,3. %) cellular subtypes with a dimini~hed NK cytotoxic activity (5,2:J: 0,6 %) when compared to healthy control rats [CD3+ (47,8 :J: 2,2 %), CD4+ (45,6 :J: 1,3 %), CD8+ (10,7 :J: 0,4 %), CD3+m<R.-Pl+ (4,9 :J: 0,4 %), NK cytotoxic activity (8,9:J: 0,7 %), ACTH (10,2 :J: 1,4 pg/m1), corticosterone (2,2 :J: O ng/m1)].. There was a inverse correlation with high levels of ACTH (92,2 :J: 38,5 pg/ml) and corticosterone (152,1 :J: 42,5 ng/ml): Substance P 20 nanomols ICV injected also increased the retention ofCD4+ (51,3 :J: 1,7 %), CD8+ (15,0:J: 0,8 %) and CD3+m<R-~I+ (10,4:J: 0,9 %) in the spleen ofEAE rats with a lower NK cytotoxic activity (5,4 :J: 0,6 %) in the peak ofthe clínical symptoms and decreased levels of ACTH (21,3 :J: 2,3 pg/ml) and corticosterone (44,1 :J: 16,2 nglml) when compared to injected saline controls [CD4+ (41,2 :J: 4 %), CD8+ (11,8 :J: 1,5 %) and CD3-+m<R-Pl+ (6,5 :J: 1,7 %) NK cytotoxic activity (7,6:J: 0,2 %), ACTH (47,1 :J: 6 pglm1), corticosterone (120,3 :J: 17,8 ng/m1) ]. When treated with a substance P antagonist NKT cells presented a decreased splenic retention [antagonist + saline (0,5 :J: 0,04 %) e antagonist + SP (0,6 :J: 0,1 %)] when compared to saline-treated group (1,3 :J: 0,1 %), suggesting a role for substance P in the migration control ofthis type of cell. We can conc1ude that the results ofthis work suggest a role for substance P in the moduJation of the HP A axis, to the lymphocyte traffic control and to the innate immune response in chronic autoimmune inflammatory diseases