Orientador: Maria Luiza Silveira Mello

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia

Resumo: A freqüência e a intensidade de fragmentação do DNA, relacionadas à morte celular programada, variam nos eritrócitos nucleados dos vários vertebrados. Como os dados de fragmentação de DNA em répteis são escassos, no presente trabalho foram estudados eritrócitos de serpentes (Crotalus...

Resumo: A freqüência e a intensidade de fragmentação do DNA, relacionadas à morte celular programada, variam nos eritrócitos nucleados dos vários vertebrados. Como os dados de fragmentação de DNA em répteis são escassos, no presente trabalho foram estudados eritrócitos de serpentes (Crotalus durissus terrificus, Bothrops jararaca, B. alternatus e B. neuwiedii) em termos de fragmentação de DNA relacionada à supraorganização da cromatina e morte celular. O estudo foi estendido a espécimes de C. d. terrificus infectados por Hepatozoon sp.. Foram realizados análise de imagem da cinética de hidrólise de Feulgen, ensaio de TUNEL, ensaio Cometa e observações em microscopia eletrônica de transmissão. Poucos eritrócitos foram encontrados em morte celular. O DNA das serpentes, especialmente de C. d. terrificus e B. neuwiedii, mostrou ser mais resistente à hidrólise ácida de Feulgen e à fragmentação do DNA pelo ensaio TONEL, quando comparados ao anfíbio Rana catesbeiana. Dados de ensaio Cometa mostraram que B. neuwiedii também teve menor fragmentação de DNA, enquanto C. d. terrificus apresentou maior freqüência de células com danos, talvez por abundância de sítios álcali-sensíveis em seu DNA e não por fragmentação de DNA ligada à morte celular. A ultraestrutura dessas células sugere alguma atividade metabólica devido à presença de mitocôndrias, Complexos de Golgi e nucléolo. B. jararaca e B. alternatus apresentaram diferenças na fragmentação de DNA/morte celular quando comparados com C. d. terrificus e B. neuwiedii, sugerindo-se relação com especiação selecionada por diferentes hábitats. Nos espécimes infectados foram encontrados eritrócitos infectados e não-infectados pelo protozoário. A presença de Hepatozoon sp. como parasita em serpentes, inclusive no interior dos eritrócitos circulantes, induz um aumento da fragmentação de DNA em C. d. terrificus induzindo células, inclusive não infectadas, à morte celular

Abstract: The frequency and intensity of the DNA fragmentation, related to programmed cell death, varies in nucleated erythrocytes of various vertebrates. As data on DNA fragmentation in reptiles are scarce, in the present work erythrocytes of snakes (Crotalus durissus terrificus, Bothrops jararaca,...

Abstract: The frequency and intensity of the DNA fragmentation, related to programmed cell death, varies in nucleated erythrocytes of various vertebrates. As data on DNA fragmentation in reptiles are scarce, in the present work erythrocytes of snakes (Crotalus durissus terrificus, Bothrops jararaca, B. alternatus and B. neuwiedii) were studied in terms of DNA fragmentation related to chromatin supraorganization and cell death. The study was extended to C. d. terrificus specimens infected by Hepatozoon sp. Image analysis of Feulgen hydrolysis kinetics, the TONEL assay, the single cell gel electrophoresis, and electron microscopy observations were undertaken. A few circulating erythrocytes were found committed to cell death. The snake's DNA, especially of C. d. terrificus and B. neuwiedii, showed to be more resistant to the Feulgen acid hydrolysis and to the DNA fragmentation revealed by the TONEL assay, when compared to the amphibian Rana catesbeiana. Data on the Comet assay showed that B. neuwiedii had less DNA fragmentation, although C. d. terrificus showed more frequency of damaged cells, perhaps of due to abundance of alkali-sensitive DNA sites and not to the DNA fragmentation related to the cell death. The ultrastructure of these cells suggested a certain cell metabolic activity due to the presence of mitochondria, Golgi complexes and nucleolus. B. jararaca and B. alternatus showed differences in DNA fragmentation/cell death as compared to C. d. terrificus and B. neuwiedii, possibly related to the selected speciation by the different habitas. In the infected specimens erythrocytes were found infected and non-infected by the protozoon. The presence of Hepatozoon sp. as a snake parasite, inclusive inside the circulating erythrocytes, induces increase in the DNA fragmentation of C. d. terrificus erythrocytes even of non-infected cells, to cell death