FMNL1 : caracterização de um novo gene humano relacionado com a familia das forminas
Patricia Maria Bergamo Favaro
TESE
Português
(Broch.)
T/UNICAMP F277f
Campinas, SP : [s.n.], 2006.
371 p. : il.
Orientador: Sara Teresinha Ollala Saad
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Resumo: Forminas são proteínas relacionadas com o controle de morfogênese, diferenciação embrionária, citocinese, polaridade e sobrevivência celular. São conservadas entre várias espécies, incluindo fungos, plantas, moscas de fruta, camundongos e humanos, apresentando múltiplos domínios. Com o...
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Resumo: Forminas são proteínas relacionadas com o controle de morfogênese, diferenciação embrionária, citocinese, polaridade e sobrevivência celular. São conservadas entre várias espécies, incluindo fungos, plantas, moscas de fruta, camundongos e humanos, apresentando múltiplos domínios. Com o objetivo de descrever novas proteínas, através das informações geradas pelo projeto Genoma do Câncer Humano, uma parceria entre a Fapesp e o Instituto Ludwig, duas EST humanas (expression sequence tags) foram identificadas com homologia aos genes da família das forminas. O objetivo do presente estudo foi obter a seqüência completa do RNAm deste novo gene e a estrutura primária da proteína para estudos de localização, interações com outras proteínas e estudos funcionais da mesma. Para obter a seqüência completa do RNAm, foram realizadas buscas no banco de dados genômico do NCBI (National Center for Biotechnology lnformation) e usadas técnicas de biologia molecular. Assim, após a obtenção da seqüência completa do novo RNAm foi possível o depósito do mesmo no banco de dados do portal NCBI, com o nome de Formina Leucocitária Humana (número de acesso AY278319). Posteriormente, baseando-se na nomenclatura de novos genes e proteínas, aprovada pelo Gene Nomenclature Committee RUGO, o novo gene foi renomeado formin-like 1, doravante FMNL 1. A produção de um anticorpo policlonal específico para a proteína codificada pelo FMNL1, permitiu o estudo de sua expressão em diversos tecidos humanos. Através da técnica de Western Blotting, foi observada expressão preferencial em células neoplásicas, especialmente linfóides. Dentre os tecidos normais, foi detectada expressão apenas em células mononucleares de sangue periférico, em linfonodo e preferencialmente em células CD19- quando comparadas com células CD19+ de tonsilas normais. Dentre as linhagens celulares neoplásicas, a expressão foi maior em MOLT-4 e Jurkat, quando comparadas com outras linhagens mielóides, indicando expressão preferencial da proteína em neoplasias linfóides. Além disso, a alta expressão da proteína foi observada em células mononucleares de sangue periférico de 20 pacientes com. LLC (leucemia linfóide crônica), quando comparadas com células mononucleares de sangue periférico de indivíduos normais. Quando a expressão da proteína FMNL1 foi estudada em diferentes tipos histológicos de Linfomas não-Hodgkin (LNH) e em linfonodos reativos, novamente foi observada a expressão preferencial no tecido neoplásico em relação ao tecido normal, sendo os LNH- T aqueles com expressão mais significativa. Esta nova proteína FMNL1 localiza-se no citoplasma, conforme verificado pela microscopia confocal e confirmado através da técnica de separação de frações. Das interações desta proteína, foi detectada a associação de FMNL 1 com AKT, sendo que essa associação é independente da ativação de AKT. Também foi observado que a ativação da via das caspases em duas linhagens celulares neoplásicas levava à diminuição da expressão da proteína FMNL 1. Em síntese, a expressão preferencial da proteína FMNL1 em tecidos neoplásicos línfóides e a sua associação com AKT, sugere a sua participação na sobrevivência dessas células e, possivelmente, na fisiopatologia das neoplasias hematológicas
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Abstract: Formins are proteins that are involved in processes such as morphogenesis, embryonic differentiation, cytokinesis, cell polarity and survival. The formins are multidomain proteins that are conserved from plants to fungi and vertebrates. A search of the ORESTES database, generated from the...
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Abstract: Formins are proteins that are involved in processes such as morphogenesis, embryonic differentiation, cytokinesis, cell polarity and survival. The formins are multidomain proteins that are conserved from plants to fungi and vertebrates. A search of the ORESTES database, generated from the Human Cancer Genome Project, identified 2 ESTs that were similar to the Formin-related proteins. The aim of this study was to obtain the full-Iength sequence ofthis new gene, the primary structure ofthe protein coded by this gene, its subcellular localization and to characterize its possible interaction with other proteins in addition to functional studies. In an attempt to obtain the full-Iength sequence of this rnRNA, searches in the human genome database at NCBI (National Center for Biotechnology Information) and molecular biology techniques were performed. The whole coding sequence ofthis gene was named Human Leukocyte Formin and was deposited at the human genome database at NCBI (GenBank Accession No. AY278319). Later, based on the HUGO Gene Nomenc1ature Committee, the new gene was renamed formin-like 1 and the symbol FMNLl will herein be used. The production of a polyc1onal antibody specific for the protein FMNLl allowed the study of the protein's expression in different human tissues. Using the Westem Blotting technique, a preferential expression of this protein in lymphoid malignancies was observed. Among normal tissues, a low expression in lymph node, peripheral blood mononuClear cells and in CD19- cells (when compared with CD19+ cells from normal tonsils) was observed. Among the malignant celllines, a high expression of the protein was detected in MOLT-4 and the Jurkat cell line, when compared with myeloid cancer cell lines, suggesting a preferential expression of FMNLl in lymphoid malignancies. Moreover, a high expression of the protein in peripheral blood mononuc1ear cells from 20 chronic lymphocytic leukemia patients was observed when compared with peripheral blood mononuc1ear cells of normal donors. When the expression of FMNLl protein was compared among different histological types of non-Hodgkin's lymphoma (NHL) and reactive lymph nodes, again, a preferential expression of the protein in the malignant tissue was detected and the T cell NHL presented the highest expression. This new protein is located in the cytoplasm of the cells, as observed by confocal microscopy and confirmed by separation of the cellular ftaction. With regard to the interactions ofthis new protein, an association ofFMNLI with AKT was detected, and this association was not dependent on AKT activation. A decrease in FMNLI expression in 2 cancer celllines after caspase activation was also detected. ln conclusion, the preferential expression of FMNLI in lymphoid malignancies and its association with AKT, suggests the role ofFMNLI in cell survival and a possible role in the pathophysiology ofhematological malignancies
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Patricia Maria Bergamo Favaro
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