Cicatrização de feridas em camundongos FAT-1 [recurso eletrônico] : envolvimento da via anti-inflamatória colinérgica = Wound healing in FAT-1 mice: involvement of the cholinergic anti-inflammatory pathway
Thamiris Candreva
DISSERTAÇÃO
Português
T/UNICAMP C161c
[Wound healing in FAT-1 mice]
Limeira, SP : [s.n.], 2017.
1 recurso online (84 p.) : il., digital, arquivo PDF.
Orientador: Hosana Gomes Rodrigues
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas
Resumo: A inflamacao e a primeira fase do processo de cicatrizacao de feridas e esta pode ser dividida em resposta inflamatoria inicial e tardia. A resposta inflamatoria tardia e essencial ao controle de mediadores pro-inflamatorios e resolucao da inflamacao, sendo determinante ao inicio da proxima...
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Resumo: A inflamacao e a primeira fase do processo de cicatrizacao de feridas e esta pode ser dividida em resposta inflamatoria inicial e tardia. A resposta inflamatoria tardia e essencial ao controle de mediadores pro-inflamatorios e resolucao da inflamacao, sendo determinante ao inicio da proxima fase de formacao de tecido ou proliferacao. Acidos graxos poli-insaturados das familias 'omega'-6 e 'omega'-3, modulam o perfil inflamatorio, sendo cada vez mais estudados no processo de reparo tecidual. Assim, buscando compreender o papel destes acidos graxos na fase inflamatoria tardia do processo de cicatrizacao de feridas, utilizamos como objeto de estudo, camundongos transgenicos denominados FAT-1, capazes de produzir endogenamente, acidos graxos 'omega'-3 a partir de acidos graxos 'omega'-6. Para verificar a composicao lipidica destes camundongos, avaliamos por cromatografia gasosa, o plasma e o tecido cicatricial, 3 dias apos a inducao da ferida. No plasma, os camundongos transgenicos reduziram a concentracao do acido graxo araquidonico (AA) e aumentaram a concentracao dos acidos graxos alfa-linolenico (ALA), eicosapentaenoico (EPA) e docosahexaenoico (DHA), reduzindo a proporcao 'omega'-6/'omega'-3 em 32,9%, quando comparados ao grupo wild type (WT). Ja no tecido cicatricial, estes camundongos apresentaram reducao da porcentagem de AA nas classes lipidicas teciduais de fosfatidilcolina (PC) e fosfatidiletalonamina (PE) e, aumento dos acidos graxos docosapentaenoico (DPA) e DHA nas classes lipidicas teciduais de PC, PE e de triacilglicerol (TAG). Com isto, os camundongos transgenicos obtiveram uma reducao da proporcao 'omega'-6/'omega'-3, equivalente a 56,4% em PC, 55,1% em PE e 39,1% em TAG, em relacao ao grupo WT. Em analise do fechamento da ferida pelo programa Image J, os camundongos FAT-1 mantiveram a area da ferida maior desde o 1¿ dia apos a inducao, sendo que no ultimo dia de analise (14¿ dia), a area da ferida era duas vezes maior que a do grupo WT (p<0.01). Na analise da atividade da mieloperoxidase (MPO) por espectrofotometria, os camundongos transgenicos exibiram aumento da atividade no tecido cicatricial de 3 dias, quando comparados ao grupo WT (p<0.05). Considerando este mesmo tempo de ferida para todas as demais analises, observamos atraves de PCR em tempo real, que os camundongos FAT-1 aumentaram a expressao genica dos marcadores celulares CD206 e CD280 (p<0.05), representativos de macrofagos M2. Contudo, pelo metodo de ELISA, verificou-se que estes camundongos aumentaram a producao dos mediadores: IL-6 (p<0.05), CXCL1 (p<0.05), CXCL2 (p<0.01), TIMP-1 (p<0.01) e VEGF (p<0.05) e reduziram IL-10 (p<0.05), indicando uma modulacao da resposta inflamatoria tardia. Buscando investigar se a via anti-inflamatoria colinergica estaria influenciando esta resposta, analisamos a producao de acetilcolina (ACh) e colina livre pelo metodo colorimetrico, a atividade da acetilcolinesterase (AChE) por espectrofotometria e a expressao das proteinas 'alfa'7nAChR, STAT3 e pSTAT3, por western blottting. Os camundongos FAT-1, aumentaram a expressao proteica da 'alfa'7nAChR (p<0.001) e reduziram pSTAT3 (p<0.05), exibindo um comprometimento da propagacao do sinal anti-inflamatorio, no ambiente intracelular. Para analisar o impacto desta inflamacao tardia exacerbada, analisamos por PCR array, a expressao de genes presentes em todo o processo de cicatrizacao de feridas. No grupo FAT-1, genes essenciais a formacao e manutencao da matriz extracelular (MEC) foram negativamente modulados. Assim, concluimos que o nao controle da resposta inflamatoria tardia pelos camundongos FAT-1, pode ter prejudicado as funcoes da MEC e contribuido para o atraso no reparo tecidual
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Abstract: Inflammation is the first stage of the wound healing process and can be divided into initial and late inflammatory response. The late inflammatory response is essential for the control of pro-inflammatory mediators and resolution of inflammation, and is decisive at the beginning of the...
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Abstract: Inflammation is the first stage of the wound healing process and can be divided into initial and late inflammatory response. The late inflammatory response is essential for the control of pro-inflammatory mediators and resolution of inflammation, and is decisive at the beginning of the next phase of tissue formation or proliferation. Polyunsaturated fatty acids of 'omega'-6 and'omega'-3 families, modulate the inflammatory profile, being increasingly studied in the tissue repair process. Thus, to understand the role of these fatty acids in the late inflammatory phase of the wound healing process, we used FAT-1 transgenic mice capable of endogenously producing 'omega'-3 fatty acids from 'omega'-6. To verify the lipid composition of these mice, we evaluated by gas chromatography, plasma and scar tissue 3 days after wound induction. In the plasma, transgenic mice reduced arachidonic acid (AA) concentration and increased the concentration of alpha-linolenic acid (ALA), eicosapentaenoic (EPA) and docosahexaenoic (DHA) fatty acids, reducing the ù-6/ù-3 ratio in 32,9%, when compared to the wild type (WT) group. In the scar tissue, these mice had a reduction in the percentage of AA in the lipidic tissue classes of phosphatidylcholine (PC) and phosphatidylalonamine (PE) and, increase in the fatty acids docosapentaenoic acid (DPA) and DHA in the lipidic tissue classes of PC, PE and triacylglycerol (TAG). Thus, the transgenic mice obtained a reduction of 'omega'-6/'omega'-3 ratio, equivalent to 56,4% in PC, 55,1% in PE and 39,1% in TAG, in relation to the WT group. In the analysis of wound closure by the Image J program, FAT-1 mice maintained the major wound area from the 1st day after induction, and on the last day of analysis (14th day), the area of the wound was two times greater than that of the WT group (p<0.01). In the analysis of myeloperoxidase activity (MPO) by spectrophotometry, the transgenic mice showed increased activity in the cicatricial tissue of 3 days, when compared to the WT group (p<0.05). Considering this same time of wound for all other analyzes, we observed through PCR real time, that FAT-1 mice increased the gene expression of CD206 and CD280 cell markers (p<0.05), representative of M2 macrophages. However, by the ELISA method, these mice were found to increase the production of mediators: IL-6 (p<0.05), CXCL1 (p<0.05), CXCL2 (p<0.01), TIMP-1 (p<0.01) and VEGF (p<0.05) and reduced IL-10 (p<0.05), indicating a modulation of the late inflammatory response. In order, to investigate whether the cholinergic anti-inflammatory pathway was influencing this response, we analyzed the production of acetylcholine (ACh) and free choline by colorimetric method, acetylcholinesterase activity (AChE) by spectrophotometry and expression of 'alpha'7nAChR, STAT3 and pSTAT3 proteins, by western blotting. FAT-1 mice increased the protein expression of 'alpha'7nAChR (p<0.001) and reduced pSTAT3 (p<0.05), exhibiting impairment of the propagation of the anti-inflammatory signal, in the intracellular environment. To analyze the impact of this late inflammation exacerbated, we analyzed by PCR array, the expression of genes present throughout the wound healing process. In FAT-1 group, genes essential for the formation and maintenance of the extracellular matrix (ECM) were negatively modulated. Thus, we concluded that the non-control of the late inflammatory response by the FAT-1 mice, may have impaired the ECM functions and contributed to delayed tissue repair
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Rodrigues, Hosana Gomes, 1980-
Orientador
Araujo, Eliana Pereira de, 1965-
Avaliador
Cicatrização de feridas em camundongos FAT-1 [recurso eletrônico] : envolvimento da via anti-inflamatória colinérgica = Wound healing in FAT-1 mice: involvement of the cholinergic anti-inflammatory pathway
Thamiris Candreva
Cicatrização de feridas em camundongos FAT-1 [recurso eletrônico] : envolvimento da via anti-inflamatória colinérgica = Wound healing in FAT-1 mice: involvement of the cholinergic anti-inflammatory pathway
Thamiris Candreva