Orientador: Danilo Ciccone Miguel

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia

Resumo: A leishmaniose é uma doença parasitária causada por protozoários do gênero Leishmania que afeta populações de países tropicais e subtropicais do planeta. Nos últimos cinco anos, mais de 1 milhão de pessoas foram acometidas pela forma cutânea da doença, enquanto cerca de 20 mil mortes são...

Resumo: A leishmaniose é uma doença parasitária causada por protozoários do gênero Leishmania que afeta populações de países tropicais e subtropicais do planeta. Nos últimos cinco anos, mais de 1 milhão de pessoas foram acometidas pela forma cutânea da doença, enquanto cerca de 20 mil mortes são registradas anualmente devido a forma visceral. Dentre os obstáculos existentes para o controle desta parasitose, destacamos o insucesso do tratamento medicamentoso, justificada por esquemas de tratamento prolongados e administração parenteral para a maioria dos medicamentos de escolha; elevada toxicidade; falhas terapêuticas; custo elevado e relatos de seleção de linhagens resistentes ao fármaco de primeira escolha. Sabendo-se dos desafios existentes, a necessidade de se buscar alternativas quimioterápicas para a leishmaniose em suas diferentes formas clínicas torna-se indispensável. Logo, o presente estudo buscou determinar a atividade leishmanicida de derivados da artemisinina sintetizados a partir de extratos de folhas de Artemisia annua L., cultivadas experimentalmente no Centro Pluridisciplinar de Pesquisas Químicas, Biológicas e Agrícolas da UNICAMP. Artemisinina e seus derivados são comumente empregados na terapêutica da malária há muitos anos. Ensaios de viabilidade celular foram realizados contra formas promastigotas e assim foram estabelecidas concentrações inibitórias do intermediário da síntese de derivados de artemisinina, diidroartemisinina, e os produtos artemeter e ácido artesúnico para as espécies: Leishmania (Viannia) braziliensis, L. (L.) amazonensis e L. (L.) infantum. A espécie L. (V.) braziliensis se mostrou mais sensível à artemisinina e seus derivados, em especial à diidroartemisinina e ao ácido artesúnico. A seguir foi determinada a atividade dos dois derivados em infecções in vitro de macrófagos derivados de células de medula óssea de camundongos. Houve diminuição significativa do número de amastigotas intracelulares após 24 e 48 horas de incubação, 96,6% e 97,6% para a diidroartemisinina e 92,5% e 80,6% para o ácido artesúnico, respectivamente. Na tentativa de elucidação de mecanismo(s) de ação da diidroartemisinina, foram conduzidos ensaios para detecção de alteração na permeabilidade celular, no consumo de oxigênio e produção de peróxido de hidrogênio. Os resultados mostraram, na concentração relativa à EC25%, uma diminuição no controle respiratório, mas sem comprometimento da atividade da cadeia respiratória do parasito. Houve aumento na produção de peróxido de hidrogênio citosólico de 136%, sem liberação de superóxido mitocondrial. Tais achados demonstram que há um grande potencial para avaliação da atividade destas moléculas em modelos experimentais de leishmaniose

Abstract: Leishmaniasis is a parasitic disease caused by protozoa of the genus Leishmania that affects populations of tropical and subtropical countries of the planet. Over the past five years, more than 1 million people have been affected by the cutaneous form of the disease, while about 20k deaths...

Abstract: Leishmaniasis is a parasitic disease caused by protozoa of the genus Leishmania that affects populations of tropical and subtropical countries of the planet. Over the past five years, more than 1 million people have been affected by the cutaneous form of the disease, while about 20k deaths are recorded annually due to the visceral form. Among several obstacles to the control the disease, we must highlight the failure of drug treatment justified by long-term regimens and parenteral administration for most drugs of choice, high toxicity and cost, and reports of selection of resistant strains. Based on these drawbacks, the need to find chemotherapeutic alternatives for leishmaniasis in its different clinical forms becomes indispensable. Therefore, we aim at determining the leishmanicidal activity of artemisinin derivatives synthesized from leaf extracts of Artemisia annua L., grown experimentally at the Center for Chemical, Biological and Agricultural Research of UNICAMP. Artemisinin and its derivatives have been used for malaria therapy for many years. For this project, cell viability assays were performed against promastigote forms and thus inhibitory concentrations of the intermediate of the synthesis of artemisinin derivatives, dihydroartemisinin, and artemeter and artesunic acid products were established for the following species: Leishmania (Viannia) braziliensis, L. (L.) amazonensis and L. (L.) infantum. L. (V.) braziliensis was shown to be more sensitive to artemisinin and its derivatives, especially for dihydroartemisinin and artesunic acid. Next, the activity of those two derivatives in in vitro infections of macrophages derived from bone marrow cells of mice was determined. There was a significant decrease in the number of intracellular amastigotes after 24 and 48 hours of incubation for the two derivatives, 96.6% and 97.6% for dihydroartemisinin and 92.5% and 80.6% for artesunic acid, respectively. In the attempt to elucidate the mechanism (s) of action of dihydroartemisinin, tests were conducted to detect changes in cellular permeability, oxygen consumption and hydrogen peroxide production. The results showed in concentrations related to EC25% and EC50% that there is a decrease in respiratory control but with no impairment of parasite respiratory chain activity. There was an increase in the production of cytosolic hydrogen peroxide, without release of mitochondrial superoxide. These findings demonstrate that there is a great potential to evaluate the activity of these molecules in experimental models of leishmaniasis

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