Orientador: Pedro Luiz Rosalen

Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba

Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar, in vitro e in vivo, o efeito de méis orgânicos brasileiros nos componentes microbiano e inflamatório da doença periodontal. Oito méis produzidos de forma orgânica (OH-1 a OH-8) foram georreferenciados, esterilizados por filtração e diluídos em diferentes...

Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar, in vitro e in vivo, o efeito de méis orgânicos brasileiros nos componentes microbiano e inflamatório da doença periodontal. Oito méis produzidos de forma orgânica (OH-1 a OH-8) foram georreferenciados, esterilizados por filtração e diluídos em diferentes concentrações (% - p/v). Nos ensaios in vitro, a atividade antimicrobiana foi avaliada por microdiluição para determinação da CIM contra Streptococcus mutans ATCC 700610, Streptococcus mitis NCTC 12261, Streptococcus oralis ATCC 10557, Streptococcus salivarus ATCC 7073, Streptococcus gordonii Challis, and Streptococcus sanguinis 3K36 e Porphyromonas gingivalis W83. A atividade antibiofilme foi realizada em biofilme monoespécie de S. mutans e subgengival multiespécie contendo 32 espécies. A atividade anti-inflamatória foi avaliada por inibição da ativação de NF-kB e liberação de TNF-alfa em macrófagos Raw 264.7 (ATCC TIB-71). Foram conduzidos dois experimentos in vivo em camundongos C57BL/6J, (CEUA/UNICAMP aprovação n. 5348-1/2019), sendo o primeiro experimento no modelo de doença periodontal induzida por ligadura inoculada com Porphyromonas gingivalis W83 e o segundo uma peritonite aguda induzida por carragenina. Os dois experimentos foram conduzidos com 4 grupos, sendo eles: G1: sem desafio microbiano ou inflamatório e sem tratamento; G2: com desafio microbiano ou inflamatório e sem tratamento; G3: com desafio microbiano ou inflamatório e tratamento de OH-7 40%; e G4: com desafio microbiano ou inflamatório e tratamento com OH-7 in natura. Os grupos submetidos ao tratamento receberam por via oral 100 µL de mel orgânico (OH-7, georreferenciado) 5x ao dia, por 5 dias. Na análise estatística foi usado ANOVA one-way seguido do pós teste Tukey, e Kruskal Wallis seguido o pós teste Dunnett’s. Os OHs apresentaram atividade antimicrobiana contra o grupo dos Streptococcus e contra P. gingivalis com CIM variando entre 10% (OH-3) e 40% (OH-6) e 2% (OH-2) e 7% (OH- 6), respectivamente. Todas as amostras apresentaram atividade antibiofilme em biofilme multiespécie (p<0,05), com destaque para OH-7 a 8% e 40%. Na concentração 4% todas as amostras reduziram a ativação do NF-kB (p<0,05). OH-2, 3, 4 e 7 diminuíram os níveis de TNF-alfa em mais de 50%. Nos ensaios in vivo, o tratamento com OH-7 a in natura diminuiu a migração de neutrófilos na cavidade peritoneal e a liberação de TNF-alfa em 49% e 72%, respectivamente, em relação ao grupo controle (G2 - p<0,05). Já o ensaio de periodontite, demonstrou diminuição da reabsorção óssea em 26% (p<0,05) com o tratamento com OH-7 na concentração 40%. Portanto, os méis orgânicos interferem de forma benéfica nos componentes microbiano e inflamatório da doença periodontal, sendo a variedade OH-7 promissora para indicação a substituto do açúcar comum na dieta a fim de propiciar saúde diminuindo doenças orais inflamatórias e biofilme-dependentes.

Abstract: The aim of this study was to evaluate, in vitro and in vivo, the effect of Brazilian organic honeys on the microbial and inflammatory components of periodontal disease. Eight samples of honeys produced organically (OH-1 to OH-8), were georeferenced, sterilized by filtration and diluted in...

Abstract: The aim of this study was to evaluate, in vitro and in vivo, the effect of Brazilian organic honeys on the microbial and inflammatory components of periodontal disease. Eight samples of honeys produced organically (OH-1 to OH-8), were georeferenced, sterilized by filtration and diluted in different concentrations (w/v). In in vitro assays, antimicrobial activity was assessed by microdilution to determine MIC against Streptococcus mutans ATCC 700610, Streptococcus mitis NCTC 12261, Streptococcus oralis ATCC 10557, Streptococcus salivarus ATCC 7073, Streptococcus gordonii Challis and Streptococcus sanguinis 3K36. The antibiofilm activity was performed on S. mutans monospecie biofilm and subgingival biofilms containing 32 species. Antiinflammatory activity was assessed by inhibiting NF-kB activation and TNF-alfa release in Raw 264.7 macrophages (ATCC TIB-71). Two in vivo experiments were carried out on C57BL / 6J mice, n = 6 (CEUA / UNICAMP approval n. 5348-1 / 2019), the first experiment in the ligature-induced periodontal disease model plus Porphyromonas gingivalis W83 and the second a peritonitis acute carrageenan-induced. The two assays were conducted with 4 groups, namely: G1: without microbial or inflammatory challenge and without treatment; G2: with microbial or inflammatory challenge and without treatment; G3: with microbial or inflammatory challenge and 40% OH-7 treatment; and G4: with microbial or inflammatory challenge and treatment with natural OH-7. The groups submitted to treatment received orally 100 µL of organic honey (OH-7, georeferenced) 5x a day, for 5 days. In the statistical analysis used one-way ANOVA with Tukey post-hoc test and Kruskal Wallis followed by Dunnett’s post-hoc test. OHs showed antimicrobial activity against P. gingivalis with MIC ranging between 2% (OH-2) and 7% (OH-6). All samples showed antibiofilm activity (p <0.05), with emphasis on OH-7 at 8% and 40%. At 4% concentration, all samples reduced NF-kB activation (p <0.05). OH-2, 3, 4 and 7 decreased TNF-alfa levels by more than 50%. In in vivo tests, treatment with OH-7 in natura decreased the migration of neutrophils in the peritoneal cavity and the release of TNF-alfa by 49% and 72%, respectively, in relation to the control group (G2 - p <0, 05). The periodontitis trial, on the other hand, demonstrated a 26% reduction in bone resorption (p <0.05) with treatment with OH-7 at 40% concentration. Therefore, organic honeys have a promising influence on the microbial and inflammatory components of periodontal disease, with the OH-7 variety being promising for indication as a substitute for common dietary sugar in order to promote health by reducing inflammatory and biofilm-dependent oral diseases.

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