La interacción entre FleQ, FleN y el di-GMPc regula la expresión de genes implicados en la movilidad y la formación de biofilm en P. putida

Abstract

La alternancia entre un estilo de vida planctónico y la formación de estructuras complejas llamadas biofilm es un fenómeno habitual en el ciclo de vida de muchas bacterias ambientales. Trabajos previos llevados a cabo en nuestro grupo en la bacteria Gram-negativa de suelo Pseudomonas putida mostraron que la proteína FleQ, un activador de promotores dependientes de σ54, junto con el mensajero secundario 3',5'-diguanilato cíclico (di-GMPc) participan coordinadamente en la regulación de funciones relacionadas con movilidad y colonización de superficies. Recientemente hemos comprobado que FleN, la proteína encargada de regular el número de flagelos en la bacteria, es también necesaria para el reconocimiento de ciertos promotores por parte de FleQ. Con el objetivo de aumentar nuestro conocimiento acerca de la red de regulación que controla esta alternancia entre estilos de vida en P. putida, se llevó a cabo un screening de promotores potencialmente involucrados en movilidad y desarrollo de biofilm fusionados a gfp y lacZ que permitió medir la expresión en diferentes fondos mutantes, incluyendo ΔfleQ y ΔfleN. Además, llevamos a cabo ensayos in vitro tales como ensayos de retardos en gel o footprint para describir la posible interacción entre los componentes en las regiones promotoras. Nuestros resultados muestran que la capacidad de unión de FleQ a sus promotores diana se encuentra modulada por la interacción con FleN, la cual actúa como proteína auxiliar a FleQ. A su vez, esta interacción se encuentra modulada de manera diferencial por los niveles de diGMPc en cada promotor. El mecanismo mediante el cual FleN interacciona con FleQ y cómo el diGMPc modifica la afinidad de esta interacción serán objeto de discusión.