Leptospirose em Angola: estudo sero-epidemiológico em pacientes febris com suspeita de malária e identificação de Leptospira spp em reservatórios silváticos

Abstract

A leptospirose é uma zoonose de ampla distribuição mundial, afetando cerca de um milhão de pessoas/ano. É causada por espiroquetas patogénicas do género Leptospira que colonizam os rins de roedores, os seus principais reservatórios. Em Angola a doença não é diagnosticada nem notificada, podendo ser confundida com a malária pela semelhança do seu quadro clínico. Assim, o presente estudo teve como objetivos: avaliar a sero-epidemiologia da leptospirose através da deteção de anticorpos (acs) anti-Leptospira interrrogans sensu lato (s.l.) em pacientes com síndrome febril suspeita de malária em Luanda e no Huambo e identificar Leptospira spp em roedores silváticos nas referidas Províncias. Foram envolvidos no estudo (N=650) pacientes, a maioria dos quais, homens (n=339; 52,2%) e crianças de ambos os sexos (56,5%). Foi aplicado um inquérito clínico-epidemiológico e obtida uma amostra sérica de cada paciente. Estas amostras foram analisadas para pesquisa de acs anti-L. interrogans s.l. e para Plasmodium spp pela Técnica de Aglutinação Microscópica (TAM) e por Gota espessa, respetivamente. Ficou a saber-se que cerca de 86% (n=560) da população inquirida vive exposta a algum fator de risco de infeção por leptospiras, incluindo a presença de ratos junto das habitações. Confirmou-se o diagnóstico de malária em 13,7% (89+/650) dos pacientes e foi observada a presença de acs anti-L. interrogans s.l., no soro de 130 (20%) pacientes, sendo que 62 (9,5%) destes, mostraram títulos ≥1:100. Foram ainda identificados os serogrupos Australis, Louisiana, Icterohaemorrhagiae e Ballum como os mais predominantes, com títulos geométricos médios (TGM) entre 245,5 e 671,4. As taxas de seropositividade para L. interrogans s.l., foram idênticas para crianças e adultos. Os resultados dos inquéritos, face aos dados serológicos, mostraram associação estatística as variáveis: localização (Luanda vs Huambo) (P<0,001), época das chuvas (P=0,002), acúmulo de lixo (P=0,028) e, em termos clínicos, icterícia (P<0,001). Em Luanda e no Huambo, capturaram-se 77 roedores com dois tipos de armadilha [guilhotina (n=40) e Tomahwak® (n=37)], esta última, manteve os animais vivos. Por análise morfométrica foram identificadas três espécies: Rattus rattus (nRr=43); R. norvegicus (nRn=21) e Mus musculus (nMm=13). Os roedores foram eutanasiados (n=37) e necropsiados (n=77) para extração dos rins e sangue para posterior análise (serologia, cultura e PCR). Após análise laboratorial detetou-se DNA leptospírico em 11+/77 roedores, tendo sido isoladas leptospiras patogénicas no tecido renal de 4+/37 roedores mantidos vivos após captura (R. norvegicus e M. musculus). A análise polifásica (serológica, fenotípica e molecular) identificou os ‘novos’ isolados como pertencentes às genoespécies L. interrogans sensu stricto (s.s.) e L. borgpetersenii (serovares Icterohaemorrhagiae e Arborea), respetivamente. Estes achados são a primeira evidência inequívoca da presença de espécies patogénicas de Leptospira circulantes em Angola e que poderão ser a fonte primária da infeção, face aos dados obtidos na população humana. O presente trabalho abre agora novos desafios de investigação nesta área quanto à perceção do padrão epidemiológico da leptospirose e consequente implementação do respetivo diagnóstico laboratorial em Angola. Acresce ainda referir que este estudo será um contributo para a indispensável inclusão da leptospirose no diagnóstico diferencial de doentes febris, face a outras doenças tal como malária.

Leptospirosis is a zoonosis worldwide distributed, affecting one million of people/year. It is caused by pathogenic spirochetes of the genus Leptospira that colonizes rodent’s kidney, its main reservoir. In Angola the disease is not diagnosed or reported and can be confused with malaria by similarity of the clinical picture. So, the present study aimed to: evaluate the seroepidemiology of leptospirosis by detection of antibodies against Leptospira interrogans sensu lato (s.l.) among febrile malaria suspected patients in Luanda and Huambo and identify Leptospira spp from sylvatic rodents in the same Provinces. For this study were involved (N=650) patients, mostly men (n=339; 52.2%) and children (56.5%) of both genders. It was applied a clinical and epidemiologic inquiry and obtained a serum sample from each patient. These samples were analysed to detect antibodies against L. interrogans s.l., and Plasmodium spp by Microscopic Agglutination Test (MAT) and microscopic blood examination (thick drop), respectively. About 86% (n=560) of the surveyed population is exposed to risk factors of infection by leptospires, including the presence of rats and mice near the dwellings. Malaria diagnosis was confirmed in 13% (89+/650) patients and were observed antibodies against L. interrogans s.l., in the serum samples from 130 (20%) patients and 62 (9,5%) of these, showed agglutination titles ≥1:100. The most predominant serogroups were identified as Australis, Louisiana, Icterohaemorrhagiae and Ballum with Geometric Mean Titre (GMT) between 245.5 and 671.4. The seropositivity rates for L. interrogans s.l., were similar for children and adults. Survey results compared to serological data showed statistical association with several variables such as, location (Luanda vs Huambo) (P <0.001), the rainy season (P = 0.002), the waste accumulation (P = 0.028) and, in clinical terms, jaundice (P <0.001). In Luanda and Huambo were captured 77 rodents by two trap types [guillotine (n=40) and Tomahawk® (n=37)] this latter, keeps them alive. By morphometric analysis three species were identified: Rattus rattus (nRr=43), R. norvegicus (nRn=21) and Mus musculus (nMm=13). The rodents were euthanized (n=37) and necropsied (n=77) for extracting the kidneys and blood for further analysis (serology, culture and PCR). After laboratory analysis leptospiral DNA was detected from 11+/77 rodents and isolated pathogenic leptospires in kidney tissue of 4+/37 live trapped rodents (R. norvegicus and M. musculus). The polyphasic analysis (phenotypic, serological and molecular) identified the ‘new’ isolates as belonging L. interrogans sensu stricto (s.s.) and L. borgpetersenii genospecies (Icterohaemorrhagiae and Arborea serovars), respectively. These findings are the first unequivocal evidence for the presence of pathogenic Leptospira species circulating in Angola and may be the primary source of the infection, matched to data obtained in the human population. The present work opens now new challenges for research in this field towards the epidemiological leptospirosis pattern and the consequent implementation of the laboratory diagnosis in Angola. In addition, this study will contribute to the necessary inclusion of leptospirosis in the differential diagnosis of febrile patients, regarding other diseases such as malaria.