Caracterización del antígeno reconocido por el anticuerpo monoclonal M22.8 y su posible implicación en la biomineralización de bivalvos

Abstract

En el laboratorio de Inmunología de la Universidad de Vigo se obtuvieron anticuerpos monoclonales dirigidos específicamente frente a larvas de mejillón. Desde su obtención, se han optimizado los métodos de detección específica de dichas larvas, y se vienen empleando de forma rutinaria por parte de la Fundación Cetmar desde finales de 2008 en el muestreo semanal que se realiza para conocer la distribución espacio-temporal de larvas.

Uno de los anticuerpos, el M22.8 se ha demostrado que tiñe en inmunofluorescencia de forma intensa a larvas de mejillón mytilus galloprovincialis y también a mytilus edulis, pero se desconoce el antígeno que reconoce, su distribución tisular, asi como su presencia en distintos estadios madurativos.

El proyecto de tesis plantea un estudio de caracterizacion a nivel molecular (proteómica-genética) y tisular del antígeno reconocido por el anticuerpo M22.8, así como la búsqueda de su posible funcionalidad (bien en el desarrollo del mejillón, en la mineralización de la concha). El trabajo incluirá el estudio no sólo de larvas de mejillón y postlarvas, sino también individuos adultos. Se compararán distintas especies de bivalvos afines, con el fin de demostrar la especificidad del anticuerpo. Las técnicas que se pretenden emplear incluyen

Proteómica: electroforesis electroforesis en una dimensión en geles de poliacrilamida en condiciones nativas (Native-PAGE), desnaturalizantes (SDS-PAGE) e isoelectroenfoque (IEF). Electroforesis en 2 dimensiones: native/native-page e IEF/SDS-PAGE (2D-PAGE) Purificación mediante uso de columnas de afinidad (inmunoafinidad). Secuenciación de novo de los péptidos obtenidos mediante espectrometría de masas (LC-MS/MS). Inmunodetección: ensayos de inmunofluorescencia, westernblot, inmunohistoquímica e inmunogold. Técnicas de biología molecular: extracción de RNA, cPCR, secuenciación, clonación.

Los péptidos obtenidos se comparán con bases de datos con el fin de conocer la proteína reconocida por el anticuerpo. Tras la obtención de la secuencia proteica se pretenden realizar estudios genómicos con el fin de conocer la expresión génica en diversos tejidos.

No laboratorio de Inmunoloxía da Universidade de Vigo, obtivéronse anticorpos monoclonais dirixidos específicamente frente a larvas de mexillón. Dende a súa obtención, optimizáronse os métodos de detección específica de ditas larvas, e vense empregando de forma rutinaria por parte da Fundación Cetmar dende fináis de 2008 no muestreo semanal que se realiza de cara a coñecer a distribución espazo-temporal das larvas. No caso dun dos anticorpos, o M22.8, demostrouse que tingue en inmunofluorescencia de forma intensa as larvas de mexillón Mytilus galloprovincialis e tamén a Mytilus edulis, nembargantes descoñécese o antíxeno que recoñece, a súa distribución tisular, así como a súa presencia en distintos estados madurativos. O proxecto de tesis plantexa un estudo de caracterización a nivel molecular (proteómica-genética) e tisular do antíxeno recoñecido polo anticorpo M22.8, así como a búsqueda da súa posible funcionalidade (ben no desenrolo do mexillón, ben na mineralización da concha). O traballo abranguerá o estudo non só de larvas de mexillón e postlarvas, senón tamén individuos adultos. Compararanse distintas especies de bivalvos afíns, co gallo de demostrar a especificidade do anticorpo. As técnicas que se pretenden empregar inclúen: Proteómica: electroforesis electroforesis nunha dimensión en xeles de poliacrilamida en condicións nativas (Native-PAGE), desnaturalizantes (SDS-PAGE) e isoelectroenfoque (IEF). Electroforesis en 2 dimensións: native/native-page e IEF/SDS-PAGE (2D-PAGE) Purificación mediante uso de columnas de afinidade (inmunoafinidade). Secuenciación de novo dos péptidos obtidos mediante espectrometría de masas (LC-MS/MS). Inmunodetección: ensaios de inmunofluorescencia, westernblot, inmunohistoquímica e inmunogold. Técnicas de bioloxía molecular: extracción de RNA, cPCR, secuenciación, clonación. Os péptidos obtidos compararanse con bases de datos con gallo de conocer a proteína recoñecida polo anticuerpo. Tras a obtención da secuencia proteica preténdese realizar estudos xenómicos co gallo de coñecer a expresión xénica en diversos tejidos.