Avaliação de peptídeos mimótopos de Leishmania na ativação da resposta celular e diagnóstico da leishmaniose

Abstract

Resumo: Leishmanioses são doenças causadas por mais de 20 espécies de protozoários pertencentes ao gênero Leishmania Ross, 1903. As duas formas clínicas principais da doença são a leishmaniose cutânea (LC) e a visceral ou kala-azar (LV). A LC é a mais frequente, enquanto a LV é a mais severa, e pode levar à morte se não diagnosticada e tratada a tempo. Em 2016, foram reportados mais de 10 mil casos de LC e mais de 3.000 casos de LV em humanos no Brasil. Cães também são acometidos por essas doenças e representam um importante reservatório, especialmente para a LV. O controle da doença é complexo devido à falta de diagnóstico preciso e medidas de imunoprofilaxia eficientes. Diante desses problemas o presente estudo visou avaliar o potencial de peptídeos mimótopos na ativação da resposta imune celular e no diagnóstico de leishmaniose. Os peptídeos foram obtidos pela técnica de phage display utilizando imunoglobulinas G específicas anti-Leishmania obtidas a partir da purificação do soro de camundongos Balb- C infectados experimentalmente com Leishmania amazonensis. Quatro peptídeos foram selecionados e após serem sintetizados quimicamente, os mesmos foram avaliados quanto à ativação da resposta imune celular pela indução da produção de óxido nítrico em células de macrófagos (Raw 264-7) e quanto à sua utilização no sorodiagnóstico de cães negativos e positivos para LV. Dentre os quatro peptídeos testados, o P2 apresentou os melhores resultados para ativação celular, visto que as células estimuladas com a presença desse peptídeo no meio de cultivo apresentaram uma produção de óxido nítrico cinco vezes superior aos valores obtidos para o controle negativo. Enquanto que nos testes de diagnóstico da leishmaniose visceral canina (LVC), o peptídeo P1 apresentou os melhores resultados quanto a sensibilidade (92%) e especificidade (76%) em teste ELISA utilizando soros de cinquenta animais positivos e cinquenta animais negativos. Os resultados indicam que os peptídeos obtidos pela técnica de phage display são promissores tanto para utilização na formulação de vacinas (P2) ou para utilização no sorodiagnóstico da LVC (P1). Na continuidade dos estudos, é necessário avaliar possíveis modificações que possam otimizar a eficiência dessas moléculas no imunodiagnóstico e imunoprofilaxia da leishmaniose.

Abstract: Leishmaniases are diseases caused by more than 20 species of protozoa belonging to the genus Leishmania Ross, 1903. The two main clinical forms of the disease are cutaneous leishmaniasis (CL) and visceral or kala-azar (VL). CL is the most frequent, while VL is the most serious, and can lead to death if not diagnosed and treated. In 2016, more than 10,000 cases of CL and more than 3,000 cases of VL were reported in humans in Brazil. Dogs are also affected by this disease and represent an important reservoir for VL. There is great difficulty in the disease control due to the lack of an accurate diagnosis and efficient immunoprophylaxis measures. In view of these problems, the present study aimed to evaluate the potential of mimotope peptides in the activation of cellular immune response and in the diagnosis of leishmaniasis. The peptides were obtained by phage display technique using specific anti-Leishmania immunoglobulins G obtained from purified serum of Balb-C experimentally infected with Leishmania amazonensis. Four peptides were selected and after being chemically synthesized they were evaluated for cellular immune response activation by inducing the production of nitric oxide in macrophage cells (Raw 264-7) and for their use on serodiagnosis of VL positive and negative dogs. Among the four peptides, P2 showed the best results for cell activation, once the cells stimulated by the presence of this peptide in the culture medium showed a production of nitric oxide five times higher than the values obtained for the negative control. While in the diagnostic tests for canine visceral leishmaniasis (CVL), P1 showed the best results regarding to sensitivity (92%) and specificity (76%) in ELISA test using sera from fifty positive animals and fifty negative animals. The results indicate that the peptides obtained by phage display technique are promising for their use in vaccines formulation (P2) and in serodiagnosis of CVL (P1). As future prospects, it is necessary to evaluate some modifications on these molecules to optimized them and achieve a better efficacy on leishmaniases diagnosis and immunoprophylaxis.